細(xì)胞老化的表現(xiàn):細(xì)胞折光性變差,鏡下可見細(xì)胞“變薄”,做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí),細(xì)胞死率會(huì)較高。但培養(yǎng)液不會(huì)發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象,仍清亮。(但如果是***污染的話,一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃,混濁,鏡下可見大量繁殖的***;若是支原體污染的話,細(xì)胞也會(huì)失去正常形態(tài),會(huì)有細(xì)胞的死)。細(xì)胞的貼壁性減弱,開始有細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中。
結(jié)合BI生產(chǎn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計(jì)之初是為了培養(yǎng)HeLa細(xì)胞以及部分哺乳類的成纖維細(xì)胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種***,適合多種細(xì)胞單層生長。以MEM為基礎(chǔ),Stanner利用Earle"sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進(jìn)一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基,可廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。
如何避免細(xì)胞抱團(tuán)?細(xì)胞生長密度不要太高,70%-80%就好(細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞,沒有出現(xiàn)成層生長),這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了。如果細(xì)胞已經(jīng)長成集落,可先將細(xì)胞低密度傳代,第二天再消化傳代,這樣連續(xù)傳三次,細(xì)胞抱團(tuán)的就越來越小,這樣幾代過后,再按照常規(guī)消化方法和時(shí)間能將細(xì)胞逐漸傳成單個(gè)的。用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。
多肽的穩(wěn)定性研究,引起多肽不穩(wěn)定的原因:(1)脫酰胺反應(yīng) :在脫酰反應(yīng)中,Asn/Gln 殘基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脫酰胺反應(yīng)的進(jìn)行。在Asn-Gly-結(jié)構(gòu)中的酰胺基團(tuán)更易水解,位于分子表面的酰胺基團(tuán)也比分子內(nèi)部的酰胺基團(tuán)易水解。(2)氧化:多肽溶液易氧化的主要原因有兩種,一是溶液中有過氧化物的污染,二是多肽的自發(fā)氧化。在所有的氨基酸殘基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分壓、溫度和緩沖溶液對氧化也都有影響。