




如何避免細胞抱團?1,用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。2,對于貼壁非常牢固的細胞(如MDCK),為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,建議分多批多次消化,這樣才能大限度地將胰酶對細胞的損傷降到低,保證細胞的狀態(tài)能夠優(yōu)。3,消化過程中不要使勁搖動培養(yǎng)瓶,這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(因為細胞沒有受力點了,所以細胞很難分散開)。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,嚴格控制好消化程度。
CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料,具有細胞膜通透性,能夠自由進入細胞;當CFSE擴散穿過細胞膜,會與細胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應而被激發(fā),發(fā)出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會進一步與細胞骨架蛋白結合,形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白。每當細胞進行分裂增殖,胞內(nèi)熒光蛋白會被平均分配到下一代細胞中,因此細胞熒光強度會隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低,可用流式細胞儀進一步偵測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,對于終判斷細胞增殖結果有直接性的影響!
細胞***的常見表現(xiàn):1.細胞生長緩慢 :細胞周期緩滯或是停滯都是***細胞的基本特征,此時細胞周期主要停滯于G1期。2.表面分泌物會增多:細胞***時顯微鏡下可見小黑點,但是小黑點增加,也有可能與培養(yǎng)條件如pH,生物污染等有關。3.細胞形態(tài)改變:如細胞體積增大、細胞扁平、胞核與核仁體積增加,如果是貼壁細胞,其細胞表面會明顯觀察到比較臟,運用常規(guī)HE染色結果會發(fā)現(xiàn),細胞表面有很多附著的臟物,細胞形態(tài)與剛開始培養(yǎng)的細胞外觀明顯不同,像是上皮細胞等可能會出現(xiàn)很多梭狀形態(tài),且細胞質(zhì)突起等形狀異常細胞。