石蠟切片制作流程1.取材:取材必須新鮮,切取材料時刀要銳利避免擠壓***,一般厚度不超過2mm,大小不超過5×5mm2,取后立即投入固定液。
2.固定:固定劑為***塊體積的10~15倍,一般為4%的中性多聚甲醛,固定時長24小時。
3.脫水:70%酒精→85%酒精→90%酒精→95%酒精→無水乙醇Ⅰ→無水乙醇Ⅱ(不同***脫水時間不同)
4.透明:透明劑能同時與脫水劑和石蠟混合,它取代了脫水劑后,石蠟便能順利地滲入***
石蠟包埋切片實驗基本步驟主要有以下幾步:
1、取材:新鮮***固定于4%多聚甲醛24h以上。將***從固定液取出在通風(fēng)櫥內(nèi)用***刀將目的部位***修平整,將修切好的***和對應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒內(nèi)。
2、脫水:將脫水盒放進吊籃里于脫水機內(nèi)依次梯度酒精進行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-I5-10min-II5-10min-蠟I1h-蠟II1h-蠟III 1h。
3、包埋:將浸好蠟的***于包埋機內(nèi)進行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟?zāi)讨皩?**從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺冷卻,蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。
4、切片:將修整好的蠟塊置于石蠟切片機上切片,片厚4μm。切片漂浮于攤片機40℃溫水上將***展平,用載玻片將***撈起,病理切片技術(shù)服務(wù),并放進60℃烘箱內(nèi)烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存?zhèn)溆谩?/p>
切片經(jīng)HE染色后,要脫水透明,才能用中性樹膠封蓋。he染色對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調(diào)整細胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時間后,取出細胞爬片,用PBS 洗滌3次。著況與***或細胞的種類有關(guān)。切片在蘇mu素染液中停留過長;或切片太厚;或分化時間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(佳厚度1-2層細胞核),要么重新染色,要么重新制片。染色的終結(jié)果是:細胞核呈藍色、胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一樣的紅色,病理技術(shù)服務(wù)提醒:在進行HE染色需要染色時間,脫水,染色時間不一樣,需要等 ,明確HE評判標(biāo)準(zhǔn)。
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