熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料[1，2].FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、***、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

染色體原位雜交實(shí)驗(yàn)的基本原理是利用特定標(biāo)記的已知堿基序列的核酸探針，依據(jù)堿基互補(bǔ)配對原理，與中期染色體玻片標(biāo)本中的同源 DNA 序列進(jìn)行雜交。

標(biāo)記可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后進(jìn)行放1射自顯影；也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛，再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，提供酵母雙雜交技術(shù)服務(wù)，即熒光原位雜交（fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH）技術(shù)。

應(yīng)用于分子病理診斷的DNA測序技術(shù)有直接測序法和焦磷酸測序法。直接測序技術(shù)主要是Sanger等發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。其原理就是根據(jù)核苷酸在某一固定的點(diǎn)開始，隨機(jī)在某一個(gè)特定的堿基處終止，產(chǎn)生A、T、C、G4組不同長度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進(jìn)行檢測，從而獲得DNA序列。直接測序法是***突變檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可檢測整個(gè)測序范圍內(nèi)已知和未知突變點(diǎn);缺點(diǎn)是步驟多，耗時(shí)長，靈敏度低，過程不易控制，在檢測已知突變位點(diǎn)方面將逐漸被熒光定量PCＲ法替代。



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