適用場景
1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用;
2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點;
3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽;
5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物;
6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。
酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點
1、無需純化蛋白;
2、檢測在活1細胞內(nèi)進行,可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實情況;
3、檢測的結(jié)果是***表達產(chǎn)物的積累效應(yīng),因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用;
4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同***、器1官、細胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫,并能分析細胞質(zhì)、細胞核等多種亞細胞部位的蛋白。
原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或***中的核酸進行雜交,稱為原位雜交,使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在***或其他真核細胞中的位置。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,植物***RNA原位雜交技術(shù)服務(wù),將有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探針)與***、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在***、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件:***、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標記物
目前,我國已穩(wěn)定開展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、***芯片和DNA測序技術(shù)。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization,CISH)技術(shù)是分子生物學、***化學及細胞學相結(jié)合產(chǎn)生的一門新興技術(shù),是利用核酸分子單鏈間堿基互補的原理,將地1高辛或生物素標記的外源核酸探針與***、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結(jié)合成雙鏈雜交分子,通過過氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應(yīng)將待測核酸在***、細胞或染色體上的位置顯示出來。根據(jù)探針種類不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。
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