熒光定量PCR(realtimePCR)技術(shù)是近幾年基于普通PCR技術(shù)發(fā)展的一種新技術(shù)。它借助熒光信號來檢測PCR產(chǎn)物，通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異探針，對PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤，在擴增過程中，每經(jīng)過一次循環(huán)，熒光定量PCR儀就會收集一次熒光信號，實時檢測整個PCR進程。用熒光定量PCR法檢測目的***僅需檢測樣本是否具有擴增信號即可，且PCR反應(yīng)具有核酸擴增的高1效性，可檢測出微小突變。根據(jù)探針標(biāo)記不同可分為TaqMan探針法和AＲMS法。既要充分保留被測核酸，染色體原位雜交檢測技術(shù)服務(wù)，（特別是RNA）不被降解，又要盡可能維持原有***或細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟：基本與免1疫***化學(xué)技術(shù)相似，即***要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.0-7.6），含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊，固定1小時即可，較大的標(biāo)本固定不要超過2小時。某些***對過度固定尤其敏感，如動物大腦，固定時間30-40分鐘，一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶***處理的器具接觸標(biāo)本。冷凍切片以厚5~30um佳，40℃烤箱內(nèi)干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱，在-20℃可保存２～３周，在-70℃可保存數(shù)月之久。
分子病理診斷，是指應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，從***水平上檢測細(xì)胞和***的分子遺傳學(xué)變化，以協(xié)助病理診斷和分型、指導(dǎo)靶向、預(yù)測反應(yīng)及判斷預(yù)后的一種病理診斷技術(shù)。分子病理診斷又稱分子病理檢查、分子病理檢測、分子病理技術(shù)。從本質(zhì)上講，凡是基于***和細(xì)胞分子水平上的***診斷都是分子病理診斷，這是廣義的分子病理診斷，如組化診斷。但目前公認(rèn)的是狹義的分子病理診斷，即基于細(xì)胞或******水平的病理診斷。
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