后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

  原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。

   雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護(hù)膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×***洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×***洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×***洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×***洗滌15分鐘×1-2次)。

        

1，組化

實(shí)驗(yàn)原理：組化（IHC），是應(yīng)用抗原與特異性結(jié)合的原理，通過酶標(biāo)與底物反應(yīng)顯色，從而對(duì)***細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行***、定性及定量的研究，稱為***化學(xué)技術(shù)。組化（IHC）具有特異性強(qiáng)、敏感度高、***準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

1， 熒光

實(shí)驗(yàn)原理：熒光（IF），是應(yīng)用抗原與特異性結(jié)合的原理，分子病理技術(shù)服務(wù)，通過熒光標(biāo)記對(duì)***細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行***、定性及定量的研究。目前皮諾飛生物主要可以對(duì)石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片、***芯片進(jìn)行熒光檢測(cè)。皮諾飛生物目前已突破傳統(tǒng)的熒光雙標(biāo)限制，開發(fā)出多色熒光技術(shù)（多可達(dá)7色）。

應(yīng)用于分子病理診斷的DNA測(cè)序技術(shù)有直接測(cè)序法和焦磷酸測(cè)序法。直接測(cè)序技術(shù)主要是Sanger等發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。其原理就是根據(jù)核苷酸在某一固定的點(diǎn)開始，隨機(jī)在某一個(gè)特定的堿基處終止，產(chǎn)生A、T、C、G4組不同長(zhǎng)度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得DNA序列。直接測(cè)序法是***突變檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可檢測(cè)整個(gè)測(cè)序范圍內(nèi)已知和未知突變點(diǎn);缺點(diǎn)是步驟多，耗時(shí)長(zhǎng)，靈敏度低，過程不易控制，在檢測(cè)已知突變位點(diǎn)方面將逐漸被熒光定量PCＲ法替代。



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