原位雜交雜交液注意事項(xiàng)：

       （1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、***葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

       （2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與***標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，植物染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的***形態(tài)結(jié)構(gòu)的***以及標(biāo)本的脫落。***葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達(dá)到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。

       在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與***結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面：1、對于腫l瘤易感***的檢測，對于腫l瘤高危人群的篩檢具有實(shí)用價(jià)值，如檢測GSTπ***以判定個(gè)體暴露于致***物是的致******性。2、腫l瘤相關(guān)病毒的檢測，如采用原位雜交方法檢測標(biāo)本中HPV、EBER等病毒。3、疑難腫l瘤的診斷和分類，尤其在鑒別診斷淋巴細(xì)胞增l生性***與淋巴細(xì)胞性腫l瘤上有著強(qiáng)大的特異性和可靠性。4、腫l瘤的個(gè)體化治l療，能夠根據(jù)腫l瘤發(fā)生l發(fā)展不同階段分子水平的特點(diǎn)，對腫l瘤的個(gè)體化和預(yù)見性治l療具有指導(dǎo)意義。5、腫l瘤的預(yù)后判斷，如采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測HER-2***在乳l腺l***病例中的表達(dá)情況，配合術(shù)后治l療，指導(dǎo)臨床用藥選擇。


FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對***、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及***水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染，靈敏度能得到保障，可進(jìn)行多色觀察分析，因而可同時(shí)使用多個(gè)探針，縮 短因單個(gè)探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。


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