既要充分保留被測(cè)核酸,(特別是RNA)不被降解,又要盡可能維持原有***或細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟:基本與免1疫***化學(xué)技術(shù)相似,即***要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時(shí)用刀片切成厚度不超過(guò)4mm的小塊,固定1小時(shí)即可,較大的標(biāo)本固定不要超過(guò)2小時(shí)。某些***對(duì)過(guò)度固定尤其敏感,如動(dòng)物大腦,固定時(shí)間30-40分鐘,一般不要超過(guò)1小時(shí)。取材過(guò)程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶***處理的器具接觸標(biāo)本。冷凍切片以厚5~30um佳,40℃烤箱內(nèi)干燥2小時(shí)后儲(chǔ)存在-80℃超低溫冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存數(shù)月之久。
原位雜交
實(shí)驗(yàn)原理
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在***細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。
使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針,植物染色體原位雜交測(cè)試服務(wù),在適宜條件下與***細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
1、***取材:***取材應(yīng)盡可能新鮮。由于***RNA降解較快,所以新鮮***和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。
2、細(xì)胞***固定目的與注意事項(xiàng):
(1)保持細(xì)胞結(jié)構(gòu);
(2)大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平;
(3)使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或***。
常用的固定劑是多聚甲醛,與其它醛類(lèi)固定劑不同,多聚甲醛不會(huì)與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接,因而不會(huì)影響探針穿透入細(xì)胞或***。
武漢科銳諾(多圖)-植物染色體原位雜交測(cè)試服務(wù)由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司實(shí)力不俗,信譽(yù)可靠,在湖北 武漢 的技術(shù)合作等行業(yè)積累了大批忠誠(chéng)的客戶(hù)??其J諾帶著精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念和您攜手步入輝煌,共創(chuàng)美好未來(lái)!