水稻種子是人類重要的食物來源,植物***原位雜交測試服務(wù),其發(fā)育涉及一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子,已有的研究表明,幾乎所有的水稻MADS***都在種子中表達(dá),但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。
在這項研究中,研究組基于前期的表達(dá)譜研究基礎(chǔ),分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細(xì)致分析表明,MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達(dá),且在受精后的母體***表達(dá)量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1***植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學(xué)切片、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記實驗和全***組表達(dá)譜芯片分析等,研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進(jìn)珠心細(xì)胞和珠心突起處的降解。進(jìn)一步的體外凝膠阻滯實驗顯示,MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)***的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達(dá),進(jìn)而影響胚乳發(fā)育。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復(fù)一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L N***、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
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