熒光原位雜交技（fish）原理：是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過(guò)在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號(hào)，來(lái)確定與特異探針雜交后被染色的細(xì)胞或細(xì)胞器的形態(tài)和分布，或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細(xì)胞器中的***。

       熒光原位雜交技（fish）實(shí)驗(yàn)步驟：

       1、***固定：***取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。

       2、脫水：***固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。

       3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片，攤片機(jī)撈片，62°烤箱烤片2h。

       4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無(wú)水乙醇Ⅰ 5min-無(wú)水乙醇Ⅱ 5min，風(fēng)干，DEPC水浸泡。

       5、消化：根據(jù)***固定時(shí)間長(zhǎng)短，切片于修復(fù)液中煮沸10分鐘，自然冷卻。后***筆畫(huà)圈，根據(jù)不同***不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

原位雜交是在分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一，是在研究生物體發(fā)育過(guò)程中的一種極為重要的分子遺傳學(xué)的研究方法。其英文名為insitu hybridization，水稻RNA原位雜交檢測(cè)技術(shù)服務(wù)，其中in situ為拉丁文，字面的意思理解就是說(shuō)在其原來(lái)的天然的位置處雜交。用已標(biāo)記的核酸探針與***切片或細(xì)胞中的待測(cè)核酸中的互補(bǔ)序列雜交， 從而對(duì)***細(xì)胞中的核酸進(jìn)行定性、***和相對(duì)定量分析。是一種直接、簡(jiǎn)便的研究******和表達(dá)的方法?；驹?-堿基互補(bǔ)配對(duì)原理


分子病理學(xué)在蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子水平上，應(yīng)用分子生物學(xué)理論、技術(shù)及方法研究***發(fā)生L發(fā)展的過(guò)程，從而為傳統(tǒng)的病理學(xué)注入了生機(jī)。在如今的臨床病理診斷過(guò)程中，運(yùn)用核酸原位雜交、PCR技術(shù)、免1疫熒光、免1疫***化學(xué)染色等技術(shù)，能夠更加深化對(duì)***的本質(zhì)認(rèn)識(shí)，對(duì)于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導(dǎo)意義。分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面：1、對(duì)于腫1瘤易感***的檢測(cè)，對(duì)于腫1瘤高危人群的篩檢具有實(shí)用價(jià)值，如檢測(cè)GSTπ***以判定個(gè)體暴露于致***物是的致******性。2、腫1瘤相關(guān)病毒的檢測(cè)，如采用原位雜交方法檢測(cè)標(biāo)本中HPV、EBER等病毒。


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