





外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請(qǐng),外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個(gè)重要問題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質(zhì)量如何?
現(xiàn)階段,對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對(duì)外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié),今天我們來看看外泌體的粒徑分析。
外泌體粒徑分析原理
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對(duì)每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追1蹤和分析,結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。
外泌體的組成:外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、熱休1克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關(guān)蛋白,但是不同來源的外泌體的組成有差異。
外泌體的提取方式:
1、離心法:此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。
2、過濾離心:這種操作簡單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度較高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜
4、免1疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單,但生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性。
5、色譜法:此種方法分離出的外泌體大小均一,但設(shè)備特殊,應(yīng)用不廣泛。
外泌體是由細(xì)胞分泌的納米級(jí)膜性小囊泡,直徑約30~150nm。外泌體來源多樣,外泌體NTA測(cè)試服務(wù),廣泛存在并分布于各種生物液體中,富含來源細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸,參與細(xì)胞間的信息交流。不同病理和生理?xiàng)l件下,外泌體的內(nèi)容物不盡相同,因此外泌體可以很好地反映生物體的***與健康狀態(tài)。此外,外泌體特殊的膜結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)其內(nèi)容物如RNA(microRNA、mRNA、lncRNA、circRNA)免受酶的降解,保證其能在各類體液中被穩(wěn)定檢測(cè)到,因此外泌體是研究各種***的良好生物學(xué)材料,可作為腫1瘤潛在的biomarker和治1療靶點(diǎn),亦可作為***/藥1物的遞送載體,在***的診斷和治1療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

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