******原位雜交實驗步驟：

       1. 將準(zhǔn)備做原位雜交的樣本常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。

       2. 玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。

       3. 石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

       4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

原位末端凋亡檢測（Tunel）

實驗原理： TUNEL技術(shù)可對***或細(xì)胞中凋亡小體或單個凋亡細(xì)胞進行染色，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生***學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點，利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如，生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端，再用組化法或熒光檢測凋亡細(xì)胞。

染色體發(fā)現(xiàn)距今已有150多年的歷史，染色體檢測被廣泛用于動、植物及人類的細(xì)胞遺傳學(xué)研究，隨著染色體分技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展。染色體研究范圍也不斷擴大，染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)，特別是用于腫1瘤分子診斷。腫1瘤細(xì)胞的染色體變化是一非常普遍的現(xiàn)象，可分為原發(fā)和繼發(fā)兩類。在腫1瘤形成的生物學(xué)基礎(chǔ)方面，原發(fā)性的染色體變化與引起腫1瘤的直接原因有關(guān)，腫1瘤細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)各種形式的染色體畸變，如缺失、重復(fù)、易位、重排、單體斷裂及核內(nèi)復(fù)1制等；繼發(fā)性變化主要是腫1瘤細(xì)胞核型的改變。染色體的檢測對于腫1瘤的診斷、鑒別診斷、生物學(xué)行為判別等方面都重要意義。染色體的檢測方法進展很快，檢測的精1確率也不斷提高，


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