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上海瑞基生物科技有限公司

普通會員16
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企業(yè)等級:普通會員
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所在地區(qū):上海 上海
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瑞基生物科技有限公司www.realgene.com.cnRealGene是一家致力于發(fā)展成為生物醫(yī)藥研發(fā)外包服務(wù)公司。坐落在上海閔行區(qū),紫竹科技園;毗鄰上海交大、華東師范大學,及國際知名跨國公司,學術(shù)氛圍濃郁,具有得天獨厚的人文環(huán)境。瑞基擁有1400平方實驗大樓,配備有齊全的研發(fā)、實驗設(shè)備,以滿足......

細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染服務(wù)

產(chǎn)品編號:2936776                    更新時間:2020-08-15
價格: 來電議定
上海瑞基生物科技有限公司

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  • 主營業(yè)務(wù):蛋白服務(wù),基因服務(wù),分子生物試劑服務(wù)
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產(chǎn)品詳情
細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容:
1.培養(yǎng)大量狀態(tài)良好的細胞用于后續(xù)實驗。
2.負責將客戶所購買的細胞凍存保種與本實驗室,實驗完成后客戶可以要求回寄細胞。
客戶要求及實驗周期
1.客戶購買細胞郵寄與我們培養(yǎng)
客戶必須提供狀態(tài)良好的細胞我們才能夠順利快速地進行實驗。因為在郵寄過程中細胞受溫度與營養(yǎng)缺失等因素影響很大,收到細胞時很可能細胞已經(jīng)全部***或已經(jīng)污染,這樣需要客戶再次郵寄細胞,郵寄細胞在三次以內(nèi)。
2.我們也可以為客戶代為購買細胞并且提供凍存保種服務(wù),客戶需要隨時郵寄。
3.如要培養(yǎng)的為具有確定目的***的細胞株,需要提供其中相關(guān)目的***的信息。收到細胞后我們也會及時檢測目的***表達情況,如果沒有目的***表達客戶需要重新提供細胞,出現(xiàn)此情況實驗推后我們不負相關(guān)責任。
4.客戶郵寄細胞時需一并提供細胞培養(yǎng)條件及相關(guān)注意事項。
5.培養(yǎng)周期在3-7天(視細胞類型及生長情況而定)。
MTT實驗技術(shù)服務(wù)
MTT方法簡介:
四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過快速簡便的顏色反應(yīng)來檢測細胞存活數(shù)量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有***存在時,線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡***的MTT還原成藍紫色的針狀甲瓚(Formazan)結(jié)晶并沉積在細胞中,結(jié)晶物能被二甲基亞砜(DMSO)溶解,用酶聯(lián)***檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映***的數(shù)量及其活性。
目前MTT法常用于以下幾個方面的研究:
1、檢測細胞活性:常作為細胞毒性試驗的一種方法。
2、體外***敏感實驗:該方法簡便、經(jīng)濟、快速,重復(fù)性好,所需的細胞數(shù)較少,沒有***性,目前廣泛的用于臨床前的******的篩選研究。
3、一些***活性的研究
基本實驗步驟:
(1)將對數(shù)生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個/ml的細胞懸液,按1000-10000個細胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl。
(2)將平板置37℃、5%CO2濕度培養(yǎng)箱中24小時后,加入含有不同濃度受試樣本的培養(yǎng)液100μl,每個樣本不同濃度設(shè)平行的三個孔,對照組加不含樣本的培養(yǎng)液100μl,再放入培養(yǎng)箱中孵育24-72小時.
(3)用快速翻板法倒掉培養(yǎng)液,每孔加入用無***1640按5mg/ml新鮮配制的MTT溶液100μl,溫育4小時,使MTT還原為甲瓚,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亞砜)200μl,用平板搖床搖勻后,使用***測定光密度值(OD)(檢測波長570nm),以溶劑對照處理細胞為對照組,按下述公式計算化合物對細胞的***率,并按中效方程計算半數(shù)***濃度IC50。
客戶方需提供:
樣本描述,相關(guān)的實驗設(shè)計內(nèi)容如細胞類型,作用時間和樣本濃度等。
實驗周期與費用:
實驗費用以樣本數(shù)和細胞株的種類數(shù)目為單位計算,實驗周期為20個工作日,公司將在材料和預(yù)付的實驗經(jīng)費全部到位的工作日后30個工作日之內(nèi)提交實驗結(jié)果
細胞轉(zhuǎn)染服務(wù)
技術(shù)簡介:
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(***轉(zhuǎn)染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新***抗性***),潮***B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。
   轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染***比例,細胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。
技術(shù)服務(wù):
磷酸鈣轉(zhuǎn)染
磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣DNA復(fù)合物的一種將DNA導(dǎo)入真核細胞的轉(zhuǎn)染方法,磷酸鈣被認為有利于促進外源DNA與***表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細胞膜并通過胞飲作用進入***,被轉(zhuǎn)染的DNA可以整合到***的染色體中從而產(chǎn)生有不同***型和表型的穩(wěn)定***。這種方法首先由Graham和van der Ebb使用,后由Wigler修改而成??蓮V泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細胞,不但適用于短暫表達,也可生成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
該法不適用于原代細胞(所需的DNA濃度較高),操作簡便但重復(fù)性差。在實驗中使用的每種***都必須小心校準,保證質(zhì)量,甚至偏離***優(yōu)條件十分之一個pH都可能導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗。而且對于有些細胞不適用。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
脂質(zhì)體為人工膜泡,可作為體內(nèi),體外物質(zhì)轉(zhuǎn)送載體。將需轉(zhuǎn)移的DNA或RNA包裹于質(zhì)脂體,由于質(zhì)脂體具有磷脂雙層與胞膜相似,因此,可與細胞膜融合,將DNA轉(zhuǎn)入宿主細胞。
影響轉(zhuǎn)染效率差異的主要原因是細胞系間個體的差異,有的細胞系細胞膜通透性較好,質(zhì)脂體復(fù)合物較容易進入細胞,轉(zhuǎn)染效率就高。又有的細胞系本生就不容易被轉(zhuǎn)染。其次脂類與DNA形成易于轉(zhuǎn)染結(jié)構(gòu)的特性存在***效應(yīng)。其中主要的問題是毒性,表現(xiàn)為細胞聚集在一起,從壁上脫落。另為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染易于受到***中的脂肪與脂蛋白以及細胞外基質(zhì)中帶店成分,如******素等干擾引起細胞***從而影響轉(zhuǎn)染效率。
客戶方需提供:
1.生長狀況良好的宿主細胞株,一并提供細胞特性,培養(yǎng)條件及相關(guān)注意事項。
2.我們也可以為客戶代為購買細胞并且提供凍存保種服務(wù),客戶需要隨時郵寄。
3.提供質(zhì)粒,并說明質(zhì)粒大小,濃度,抗性,拷貝數(shù)等相關(guān)背景資料。

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