大腸***被廣泛用來表達(dá)那些不需要翻譯后修飾如糖基化維持活性的蛋白質(zhì),然而大腸***大量表達(dá)重組蛋白質(zhì)常常導(dǎo)致其聚集并形成蛋白沉淀——包涵體。包涵體蛋白沒有生物活性,需要復(fù)雜的溶解,復(fù)性,純化來得到有功能活性的產(chǎn)品。通常,要用高濃度的變性劑(尿素,鹽酸胍)溶解包涵體,同時(shí)加入還原劑如β-巰***,蛋白溶解后,在存在氧化劑的條件下通過緩慢去掉變性劑的方法來復(fù)性。
傳統(tǒng)的包涵體復(fù)性方法的缺點(diǎn):(1)用高濃度變性劑溶解包涵體將導(dǎo)致蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)喪失,這樣將使肽鏈隨機(jī)纏繞并使疏水表面暴露,而包涵體復(fù)性出有生物活性的蛋白質(zhì)效率低的主要原因是在溶解時(shí)失去了蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu),在復(fù)性的過程中變性的蛋白質(zhì)相互纏繞聚集沉淀。(2)在很多時(shí)候,包涵體復(fù)性的回收率大概為15-25%,其占有大腸***生產(chǎn)重組蛋白的絕大部分費(fèi)用。
RealGene采用本公司專利復(fù)性技術(shù)簡(jiǎn)化了蛋白復(fù)性程序,大大提高了蛋白復(fù)性的成功率及回收率。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
如果您需要,我們保證超過95%的包涵體均能溶解并折疊復(fù)性,提供給客戶的復(fù)性后蛋白純度為85%以上(***終純度根據(jù)含有包涵體的目的蛋白數(shù)量而定),并儲(chǔ)存于特定緩沖液中。
瑞基蛋白折疊復(fù)***務(wù)的主要內(nèi)容如下:
1.分析目標(biāo)蛋白的理化性質(zhì)
2.摸索包涵體蛋白溫和溶解方法。
復(fù)性策略是根據(jù)蛋白的序列及結(jié)構(gòu)性質(zhì)決定的。一般來說,我們的方案包括以下幾點(diǎn):
瑞基專利復(fù)性方法
直接稀釋法
透析以及滲濾
色譜復(fù)性技術(shù):SEC (體積排除色譜法), HIC (疏水相互作用色譜法), 親和柱以及IEC (離子交換層析法)
交付信息:
1L表達(dá)體系中,我們可為客戶提供純度為85%、5mg可溶性復(fù)性蛋白??扇苄詮?fù)性蛋白經(jīng)過SDS-PAGE分析,用客戶提供的測(cè)活方法測(cè)活驗(yàn)證,提供工作報(bào)告,蛋白放在特定的緩沖液中交付給客戶。
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