200×RiboGreen熒光染料
RiboGreen RNA定量***是一種超靈敏的核酸熒光染料，使用這種染料可以對溶液中的RNA進(jìn)行簡單快速的定量。常規(guī)定量RNA的方法是在260nm處檢測溶液的光吸收度，但是這種定量方法靈敏度差（4μg/ml RNA），且易受溶液中寡核苷酸、蛋白、鹽離子等的影響。使用RiboGreen熒光染料可以避免上述這些問題。
當(dāng)RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時，其幾乎沒有熒光活性；當(dāng)RiboGreen與RNA結(jié)合，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長約500nm，發(fā)射波長約525nm。使用RiboGreen熒光染料可以檢測到2.5ng/ml的RNA，這比260nm吸收法要高***倍。
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編號 |
規(guī)格 |
售價￥
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說明書*** |
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RF023 |
100ul |
600.00 |
相關(guān)產(chǎn)品：
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檢測原理:
檢測方法:
l ***的準(zhǔn)備：
1.用超純水將適量的20倍TE緩沖液稀釋成1倍的，夠當(dāng)日實(shí)驗(yàn)用量即可。
2.實(shí)驗(yàn)時需制備Quant-iT RNA工作液，可用1倍的TE（大范圍25-1000ng/ml RNA）按1:200的比例；（小范圍1-50ng/ml RNA）按1:2000的比例稀釋濃縮染料液。
3.溶液制備需用塑料器皿不能用玻璃器皿，因?yàn)?**中某些成分會吸附到玻璃器皿表面。
4.用箔金紙包裹或放置黑暗處避光保存。
5.注意：溶液在制備后3小時內(nèi)使用檢測結(jié)果會比較好。
l 儀器準(zhǔn)備：
1.關(guān)掉Modulus單管型多功能檢測儀電源開關(guān)，根據(jù)操作手冊插入Blue熒光模塊和微量適配器。
2.打開電源開關(guān)，校準(zhǔn)前先預(yù)熱1min。
3. 儀器校準(zhǔn)
3.1： 用1倍TE緩沖液稀釋100 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣至符合大小范圍檢測的需要。制備實(shí)驗(yàn)所需2倍濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣。例如，制備2000 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)樣，加RiboGreen工作液進(jìn)一步將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋到1000ng/ml。
3.2： 加50μl標(biāo)準(zhǔn)樣至含相同體積RiboGreen工作液（步驟3.1中制備）的小離心管中，充分混合，將100μl混合液轉(zhuǎn)到微量比色杯中，***小檢測體積75μl。
3.3： 用5個標(biāo)準(zhǔn)樣來校準(zhǔn)多功能機(jī)。選擇“ng/µl”為測量單位，用濃度為0 ng/µl的標(biāo)準(zhǔn)樣為空白對照。選擇與典型樣品***接近的5個標(biāo)準(zhǔn)樣，可獲得更佳性能和更高***度。
3.4 保存這次校準(zhǔn)數(shù)據(jù)以供將來使用（可選）
l 樣品分析：
1. 加50μl待檢樣品至含相同體積RiboGreen工作液的小離心管中，顛倒混勻。
2. 將100μl的檢測樣轉(zhuǎn)到微量比色杯中。
3. 讀取每一樣品，樣品濃度會在多功能機(jī)顯示屏上以ng/ml顯示結(jié)果。
注：不必在校準(zhǔn)后再次運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線；檢測校準(zhǔn)的線性，再次讀取標(biāo)準(zhǔn)樣。
參考文獻(xiàn):
1.Anal Biochem 17, 100 (1966)
2.Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch and T.Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989).