玉米赤霉烯酮（ZON）ELISA檢測***盒
（貨號：MZ570）
本***盒用于定量檢測樣本中玉米赤霉烯酮?dú)埩簟?/p>
檢測樣本：谷物、飼料、酒糟
樣本前處理：
-研磨、***-水溶液提取、過濾或離心；
分析時間：15分鐘（不包括樣本前處理時間）
檢測限：
-谷物：25ppb
特異性：交叉反應(yīng)率（%）
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分析物 |
交叉反應(yīng)率 |
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玉米赤霉烯酮 |
100 |
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α-玉米赤霉烯酮 |
76&plu***n;8 |
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β-玉米赤霉烯酮 |
23&plu***n;2 |
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α-玉米赤霉醇 |
28&plu***n;8 |
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β-玉米赤霉醇 |
8&plu***n;3 |
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玉米赤霉醇 |
18&plu***n;4 |
- 檢測原理
本***盒在預(yù)包被特異性玉米赤霉烯酮***的微孔內(nèi)進(jìn)行。將酶標(biāo)玉米赤霉烯酮和標(biāo)準(zhǔn)品或樣本在預(yù)混合孔混合后轉(zhuǎn)移到包被玉米赤霉烯酮***的微孔，孵育時，標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)玉米赤霉烯酮競爭微孔上的玉米赤霉烯酮***結(jié)合位點(diǎn)，洗板除掉所有未結(jié)合的酶標(biāo)玉米赤霉烯酮或自由玉米赤霉烯酮分子。然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測酶活性。加終止液終止反應(yīng)，450nm波長***檢測，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的玉米赤霉烯酮濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。
2.***盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被玉米赤霉烯酮***。板條可拆開單獨(dú)使用。
預(yù)混合板：空白，未包被***。
玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppb，25ppb，100ppb，500ppb，2000ppb。
酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml。
10X濃縮洗液：1瓶，50ml。
顯色液：1瓶，15ml。
終止液：1瓶，9ml。
3.需要使用但***盒不提供的***和設(shè)備
-***
-蒸餾水或去離子水
-N***
-天平
-研磨器
-搖床（可選）
-臺式離心機(jī)或Whatman 1濾紙
-恒溫箱
-氮吹儀
-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-50-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的***
4.注意事項
-僅用于體外檢測。
-一些***內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有***，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對身體***。
-小心操作，避免***接觸皮膚、眼睛和粘膜。
5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用***盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品。
-不同批次***盒內(nèi)的成分不能混用。
-請使用***盒內(nèi)提供的說明書。
6.樣本前處理步驟
-將樣本混合均勻并充分研磨；
-稱取50g研磨樣本，并加入10g N***，再加入250ml 70%***溶液。可選方案：稱取5g研磨樣本，并加入1g N***，再加入25ml 70%***溶液。
-充分振蕩3分鐘。
-選擇下列步驟的其中一個：1）過濾樣本（Whatman 1）并收集濾液；2）3500g離心力下離心5分鐘，并收集上清液。如果濃度范圍在10-2000ppb，所得濾液或上清液可直接用于檢測。否則，用70%***溶液稀釋樣本5倍，以獲得125-10000ppb濃度范圍。
建議樣本的稱取量為50g，以使得到更具代表性的樣本。
7．工作溶液準(zhǔn)備
玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品：即用；
酶偶聯(lián)物：即用；
洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶完全溶解。
稀釋后的洗液在室溫放置24小時內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。
顯色液：即用。顯色液對光敏感，應(yīng)避免光直射，避光保存。
終止液：即用。
8.檢測步驟
8.1檢測前注意事項
-檢測前將所有***室溫放置1小時；
-使用后立即將所有***放置于2-8°C；
-不得改變檢測程序；
-不得延長或縮短孵育時間；
-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；
-孵育過程中不得晃動酶標(biāo)板；
-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭；
-一旦開始實(shí)驗，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；
-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和一致性，要按照介紹的程序洗板；
-為避免交叉污染，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時要更換移液器吸頭；
-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；
-孵育時要避免光直射。建議孵育時用封板膜封板。
8.2檢測步驟
1.計算需要用到的微孔數(shù)量，標(biāo)記***大光吸收值孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。
2.每個預(yù)混合孔加100μl酶偶聯(lián)物。
3.將標(biāo)準(zhǔn)品、樣本加50μl到對應(yīng)預(yù)混合孔。
4.用移液器將預(yù)混合孔內(nèi)溶液混勻（上下吹打3次），并立即吸取100μl到對應(yīng)包被嘔吐******的微孔。注意：吸取不同微孔溶液時，要更換吸頭以避免交叉污染。
5.室溫孵育10分鐘。不得延長孵育時間，孵育時不要晃動微孔板。
6.洗板順序
-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；
-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；
-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體完全拍干。
重復(fù)洗滌過程3次。
在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。
7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來回晃動數(shù)秒鐘。
8.室溫避光孵育5分鐘。
9.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。
10.在15分鐘內(nèi)，用***450nm波長讀數(shù)。
9. 計算結(jié)果
-計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；
-用計算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100；
標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）
---------------------------- X100= (%)吸光度值
0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )
-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標(biāo)，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的濃度值(ppb)；
-由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值即為樣本中玉米赤霉烯酮的濃度。
-如果應(yīng)用50-5000濃度范圍，則結(jié)果為從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值乘以稀釋倍數(shù)5.
10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例
11.結(jié)果評價
計算出結(jié)果后，還需要驗證檢測效果。通過將得到的結(jié)果和說明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗證。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請檢測***盒的有效期、讀取吸光值使用的波長、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯誤，請聯(lián)系我們的技術(shù)支持。
12.***盒參數(shù)
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描述 |
參數(shù) |
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平均Bo吸光度 |
≥0.7 OD450nm |
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B/Bo 50% |
47-166ppb |
13．免責(zé)聲明
出現(xiàn)陽性結(jié)果時，必須用確證方法對樣本檢測。TECNA公司不承擔(dān)任何因為使用者錯誤使用***盒造成的損失。
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供應(yīng)霉菌******盒 |
******B1 |
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******M1 |
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嘔吐*** |
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T2*** |
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赭曲霉*** |
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伏馬*** |