本***盒用于定量檢測(cè)牛奶樣本中******M1殘留。

 

檢測(cè)樣本：原奶、奶粉

樣本前處理：

-原奶：2-8°C冷藏，離心

-奶粉：稀釋

 

分析時(shí)間：75分鐘（不包括樣本前處理時(shí)間）

 

檢測(cè)限：

-原奶：0.005ppb

-奶粉：0.05ppb

 

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

分析物	交叉反應(yīng)率
******M1	100
******M2	16

 

1. 檢測(cè)原理

本***盒在預(yù)包被特異性******M1***的微孔內(nèi)進(jìn)行。將******M1標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入微孔，***次孵育時(shí)，自由的******M1分子和******M1***結(jié)合，洗板除掉所有未結(jié)合的物質(zhì)。加入******-HRP偶聯(lián)物進(jìn)行第二次孵育，偶聯(lián)物封閉所有未***次孵育時(shí)未結(jié)合的***結(jié)合位點(diǎn)，然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測(cè)酶活性。加終止液終止反應(yīng)，450nm波長(zhǎng)***檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的******M1濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。

 

2.***盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被******M1***。板條可拆開單獨(dú)使用。

******M1標(biāo)準(zhǔn)溶液：7瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppt，5 ppt，10 ppt，25 ppt，50 ppt，100 ppt，250 ppt。

酶偶聯(lián)物：1瓶，250ul濃縮酶偶聯(lián)物。

酶偶聯(lián)物稀釋液：1瓶，20ml。

20X濃縮洗液：1瓶，50ml。

顯色液：1瓶，15ml。

終止液：1瓶，9ml。

 

3.需要使用但***盒不提供的***和設(shè)備
-蒸餾水

-離心機(jī)，***好是冷凍離心機(jī)。

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長(zhǎng)的***

 

4.注意事項(xiàng)
-僅用于體外檢測(cè)。
-一些***內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有***，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對(duì)身體***。
-小心操作，避免***接觸皮膚、眼睛和粘膜。
 

5.操作和存儲(chǔ)說(shuō)明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用***盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過(guò)期產(chǎn)品。
-不同批次***盒內(nèi)的成分不能混用。
-請(qǐng)使用***盒內(nèi)提供的說(shuō)明書。

 

6.樣本前處理步驟

6.1原奶

-必須在擠奶后24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，否則必須用***或類似物做穩(wěn)定處理。

-2-8°C預(yù)冷樣本，并將樣本在2-8°C、離心力3000g離心10分鐘。

-分離除***肪。

-所得脫脂奶直接用于檢測(cè)。

-如果樣本中******M1濃度在10-500ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本2倍稀釋，以使樣本的******M1濃度達(dá)到有效檢測(cè)范圍。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)2為樣本中的***終濃度值。

-如果樣本中******M1濃度在25-1250ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本5倍稀釋，以使樣本的******M1濃度達(dá)到有效范圍。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)5為樣本中的***終濃度值。

-如果樣本中******M1濃度在10-500ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本10倍稀釋，以使樣本的******M1濃度達(dá)到有效范圍。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)10為樣本中的***終濃度值。

6.2奶粉

-稱取10g奶粉，用蒸餾水定容至100ml。

-搖晃直至奶粉完全溶解。樣本稀釋倍數(shù)為10.

 

7．工作溶液準(zhǔn)備

******M1標(biāo)準(zhǔn)品：即用（使用前輕搖混勻）；

酶偶聯(lián)物：注意，為了收集到管內(nèi)所有酶偶聯(lián)物，使用前低速離心數(shù)秒鐘。計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)的需要量，用酶稀釋液將濃縮酶偶聯(lián)物1/100稀釋（例如，20ul濃縮酶偶聯(lián)物+1980ul酶稀釋液）。稀釋混勻過(guò)程不得劇烈震蕩。每次吸取濃縮酶偶聯(lián)物的量不得少于20ul。

洗液：用蒸餾水1：20稀釋（1+19）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶完全溶解。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時(shí)內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用。顯色液對(duì)光敏感，應(yīng)避免光直射，避光保存。

終止液：即用。

酶稀釋液：即用

 

8.檢測(cè)步驟

8.1檢測(cè)前注意事項(xiàng)

-檢測(cè)前將所有***室溫放置1小時(shí)；

-使用后立即將所有***放置于2-8°C；

-不得改變檢測(cè)程序；

-不得延長(zhǎng)或縮短孵育時(shí)間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育過(guò)程中不得晃動(dòng)酶標(biāo)板；

-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭；

-一旦開始實(shí)驗(yàn)，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過(guò)程的效率和一致性，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)要更換移液器吸頭；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；

-孵育時(shí)要避免光直射。建議孵育時(shí)用封板膜封板。

 

8.2檢測(cè)步驟

1.計(jì)算需要用到的微孔數(shù)量，標(biāo)記***大光吸收值孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.加入100ul各標(biāo)準(zhǔn)品/樣本到相應(yīng)微孔，輕搖混勻后封板膜封板。

3.室溫孵育45分鐘。不的延長(zhǎng)次孵育時(shí)間，不能使用自動(dòng)振蕩器。

4. 洗板

-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體完全拍干。

重復(fù)洗滌過(guò)程4次。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。

5.用多道移液器，每孔加入100ul酶偶聯(lián)物溶液。來(lái)回輕搖混勻并蓋封板膜。

6.孵育15分鐘。

7.重復(fù)步驟4洗板。

8.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來(lái)回晃動(dòng)數(shù)秒鐘。

9.室溫避光孵育15分鐘。

10.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來(lái)回晃動(dòng)數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在1小時(shí)內(nèi)，用***450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。

 

9. 計(jì)算結(jié)果

-計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；

-用計(jì)算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100；

標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )

-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的濃度值；

-要得到樣本中******M1的濃度值，還需要將從校準(zhǔn)曲線讀到的濃度乘以相應(yīng)樣本的稀釋倍數(shù)。

 

10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

11.結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算出結(jié)果后，還需要驗(yàn)證檢測(cè)效果。通過(guò)將得到的結(jié)果和說(shuō)明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗(yàn)證。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請(qǐng)檢測(cè)***盒的有效期、讀取吸光值使用的波長(zhǎng)、以及操作過(guò)程是否正確。如果不是操作錯(cuò)誤，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持。

 

12.***盒參數(shù)

 

描述	參數(shù)
平均Bo吸光度	≥0.7 OD450nm
B/Bo 50%	20-50ppt
標(biāo)準(zhǔn)品平均變異系數(shù)	≤ 6 %

 

13．免責(zé)聲明

出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，必須用確證方法對(duì)樣本檢測(cè)。TECNA公司不承擔(dān)任何因?yàn)槭褂谜咤e(cuò)誤使用***盒造成的損失。

 

供應(yīng)霉菌******盒	******B1
	嘔吐***
	玉米赤霉烯酮
	T2***
	赭曲霉***
	伏馬***