武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、***、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。故若預(yù)期雜交結(jié)果為陰性時(shí),就必須設(shè)陽性對(duì)照,當(dāng)陽性對(duì)照亦不顯色,就證明雜交過程的某一步驟或所用***問題。
原位雜交是指用特定探針***、檢測(cè)DNA、RNA的一種有效的實(shí)驗(yàn)方法,通過把特點(diǎn)序列到特殊載體上,通過轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)一條天然的RNA探針,將探針和切片樣品進(jìn)行雜交,通過一系列顯色方法,來確定RNA或者DNA表達(dá)區(qū)域;本中心原位雜交探針采用的是和生物素標(biāo)記,靈敏度和同位素相當(dāng)。目的探討熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsftuhybridization,F(xiàn)ISH)在復(fù)雜染色體異常產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 我們采用roche標(biāo)記及顯色***盒,GISH/ISH/FISH按照探針進(jìn)行收費(fèi),每個(gè)***盒每條探針可以雜交60-80張玻片,收費(fèi)為1萬5千元,GISH雜交因需要加抗淬滅劑每條探針收費(fèi)為1萬9千元。量大優(yōu)惠!
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、***、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)?;蚪M原位雜交(Genomeinsituhybridization,GISH)技術(shù)是20世紀(jì)80年代末發(fā)展起來的一種原位雜交技術(shù)。
基因檢測(cè)定義
基因檢測(cè):指通過基因芯片等方法對(duì)被測(cè)者細(xì)胞中的DNA分子進(jìn)行檢測(cè),并分析被檢測(cè)者所含致病基因、疾病易感性基因等情況的一種技術(shù)。目前基因檢測(cè)的方法主要有:熒光定量PCR、基因芯片、液態(tài)生物芯片與微流控技術(shù)等。
取材與標(biāo)本固定
1. 取材 對(duì)于原位雜交所用的材料要盡可能新鮮,為了防止RNA的降解,取材要迅速,取材后要盡快固定或冷凍保存。
2.固定 進(jìn)行原位雜交的***或細(xì)胞必須經(jīng)過固定處理,固定的目的是為了①保持細(xì)胞形態(tài)原有結(jié)構(gòu);②保存細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA的水平;③使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或***內(nèi)。
3.固定液 常用固定液有10%甲醛、4%多聚甲醛、冰醋酸-酒精混合液、Bouin氏固定液等。這些固定液都有不同的優(yōu)缺點(diǎn)因此要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,選擇的固定液。
4.固定方法 ***標(biāo)本取材后,迅速放入固定液中2~4h,取材***大小為1cm×1cm×0.5cm,不宜太大。必要時(shí),動(dòng)物***可進(jìn)行灌流固定,然后將***按要求取材放入20%蔗糖中,4℃過夜,次日可行冰凍切片。
顯色以下各步均在室溫下進(jìn)行。
(1)緩沖液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的緩沖液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的緩沖液I稀釋羊抗Dig。
(4)將稀釋液滴加在切片上,封口膜覆蓋,濕盒內(nèi)4℃孵育過夜。
(5)緩沖液I洗10min。
(6)緩沖液Ⅱ洗10min。
(7)加顯色液,封口膜覆蓋,避光室溫孵育2~20h,隨時(shí)鏡檢,當(dāng)顯色滿意時(shí)入緩沖液Ⅲ終止顯色。
顯色液臨用前配,其配方為:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④緩沖液Ⅱ 加至10ml。
(8)常規(guī)脫水、透明、封固。
結(jié)果:雜交陽性信號(hào)為紫藍(lán)色顆粒。