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• 本***盒用于體外定量檢測***、血漿、***、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中兔蛋白激酶A（PKA）的含量。
• 有效期：6個月
• 保存條件：2-8℃
• 本***盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

***盒采用雙***一步夾心法酶聯(lián)***吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被兔蛋白激酶A（PKA）捕獲***的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測***，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成***終的***。顏色的深淺和樣品中的兔蛋白激酶A（PKA）呈正相關(guān)。用***在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣本處理及要求

1.  ***：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  ***勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗***，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將***剪碎。將剪碎的***與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的***樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶***劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解***細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。***后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響***后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

標(biāo)本處理

1.  本公司只對***盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該***盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。

2.  實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合***盒的檢測范圍，計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。

4.  使用化學(xué)裂解液制備的***勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5.  若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6.  某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測***及捕獲***不匹配，而不被檢測出。

7.  建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋***解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

需要而未提供的***和器材

1. ***（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水

***盒組成

備注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：480、240、120、60、30、0 U/L

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在***盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過***大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有***都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存***。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免***和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)***不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會******盒中反應(yīng)***的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播***，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

***準(zhǔn)備

***盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測***100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用***洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。

***盒性能

1.  檢測范圍：15 U/L – 480 U/L。
2.  靈敏度：***低檢測濃度小于1.0 U/L。
3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

說明

1.  由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行***的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

2.  ***終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與***的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

3.  不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)***盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4.  只有全部使用本***盒配套***才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本***盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到***佳的檢測結(jié)果。

問題解答

若實(shí)驗(yàn)效果不好，請及時對顯色結(jié)果拍照，保留所用板條及未使用***，并妥善保存，然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：