目前已有多種方法可以將寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。這些方法總體上有兩種,表面羥基化條件,即原位合成( in situ synthesis )與合成點樣兩種。支持物有多種如玻璃片、硅片、聚膜、纖維素膜、尼龍膜等,但需經(jīng)特殊處理。作原位合成的支持物在聚合反應(yīng)前要先使其表面衍生出羥基或氨基(視所要固定***芯片的分子為核酸或寡肽而定)并與保護基建立共價連接;作點樣用的支持物為使其表面帶上正電荷以吸附帶負電荷的探針分子,通常需包被以氨基***或多聚賴氨酸等。





按照芯片上的探針對微陣列芯片進行分類,有核酸芯片、蛋白質(zhì)芯片和***芯片等,目前應(yīng)用泛的是核酸芯片,核酸芯片又有兩種類型,分別是cDNA微陣列和寡核苷酸微陣列。
cDNA***文庫由PCR產(chǎn)物組成,為雙鏈結(jié)構(gòu),長度一般在數(shù)百至數(shù)千堿基對,因而芯片的雜交條件對每個***不能保證是的,假陽性率較高,因此,金屬表面羥基化,判定cDNA微陣列的終結(jié)果時,有必要對篩選出的***進行測序。在應(yīng)用cDNA微陣列進行研究時,鐵表面羥基化,一般需要提供一個對照樣本,將其與需要研究的標本給予不同的標記,將二者燈亮混合后共同注入芯片進行孵育。掃描后得到的原始數(shù)據(jù)是各個單元格中信號強度的比率。
2)用點樣法固定在玻璃板上的DNA探針陣列,浙江表面羥基化,通過與熒光標記的靶***雜交進行檢測。這種方法點陣密度可有較大的提高,各個探針在表面上的結(jié)合量也比較一致,但在標準化和批量化生產(chǎn)方面仍有不易克服的困難。3)在玻璃等硬質(zhì)表面上直接合成的寡核苷酸探針陣列,與熒光標記的靶***雜交進行檢測。該方法把微電子光刻技術(shù)與DNA化學(xué)合成技術(shù)相結(jié)合,可以使***芯片的探針密度大大提高,減少***的用量,實現(xiàn)標準化和批量化大規(guī)模生產(chǎn),有著十分重要的發(fā)展?jié)摿Α?/p>
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