2、貼壁細(xì)胞如何分離下來?

如果把貼壁的細(xì)胞洗下來常用的辦法就是加入胰蛋白酶消化，37°C環(huán)境下放置3~5min便可，但是殘留培養(yǎng)瓶內(nèi)的胰蛋白酶對細(xì)胞***性作用，所以都會添加低濃度的以中和胰蛋白酶的。用超聲的辦法也可以把細(xì)胞分離下來，但是要注意超聲的頻率不能太大，而且細(xì)胞很嬌嫩，超聲會導(dǎo)致細(xì)胞的。這是由細(xì)胞的性質(zhì)特點決定的。

體外培養(yǎng)貼壁細(xì)胞重要的生長特點有:貼附和伸展以及接觸***和生長的密度限制。貼附并伸展，廣西細(xì)胞貼壁處理，是多數(shù)體外培養(yǎng)細(xì)胞的基木生長特點。雖然血細(xì)胞如淋巴細(xì)，胞在體內(nèi)并尤聚集的傾向并在體外可于懸浮狀態(tài)中生長，但是大多數(shù)的哺乳動物細(xì)胞在體內(nèi)和體外均附著于一定的底物而生長，在體外時這些底物可以是其他細(xì)胞、膠原、玻璃或塑料等。

一些特殊的促細(xì)胞附著的物質(zhì)(如層粘連蛋白、纖維鏈接蛋白、III型膠原、擴展因子等)可能參加細(xì)胞的貼附過程。這些促細(xì)胞附著因子均為蛋白質(zhì)，存在于培養(yǎng)液尤其之中。在培養(yǎng)過程中，這些帶陽電荷的促貼附因子先吸附于底物上，細(xì)胞貼壁怎樣處理，懸浮的圓形細(xì)胞再與已吸附有促貼附物質(zhì)的底物附著，細(xì)胞貼壁處理方法，以后細(xì)胞將伸展成其原來的形態(tài)。一-般來說，從底物脫離下來的貼附生長型細(xì)胞，不能長期在懸浮中生長而將逐漸退變，除非這是一些轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞或細(xì)胞。另外，經(jīng)過無馴化后的細(xì)胞，會從貼壁生長轉(zhuǎn)到懸浮生長，目前在生物工程制藥領(lǐng)域，趨勢是使用無的懸浮培養(yǎng)為主。