實際操作時需要注意的是，雖然共價偶聯(lián)的方法優(yōu)于物理吸附，但基于氨基和羧基的***固定方法仍具有一定程度的隨機性，有時在Fab區(qū)（用于結(jié)合抗原）存在易于修飾的氨基/羧基，在與固體表面偶聯(lián)后會造成***的失活。在***領域，***與的偶聯(lián)同樣存在上面所說的問題（由于***表面可能存在很多可修飾的氨基酸，表面醛基修飾處理，不能確定連在哪個部位

微陣列芯片應用流程

1）制備靶點

從生物標本中提取核苷酸并進行標記；

（2）雜交

讓靶點與芯片上的cDNA或寡核苷酸序列進行孵育；

（3）獲取數(shù)據(jù)

掃描與探針雜交的靶點表現(xiàn)出來的信號強度

（4）數(shù)據(jù)分析

從大量數(shù)據(jù)中得出具有生物學意義的結(jié)論

微陣列芯片技術(shù)通過測定能夠與探針雜交的mRNA的數(shù)量，反映表達此mRNA的***的轉(zhuǎn)錄情況，芯片的構(gòu)建首先要根據(jù)研究的需要選擇***及相應的探針，表面醛基修飾方法，其次是從標本中提取mRNA，臺灣表面醛基修飾，并制備出靶點，然后將靶點加入芯片，進行孵育雜交、沖洗掉沒有雜交的樣品以及掃描等操作，表面醛基修飾廠家，得到原始數(shù)據(jù)，再將這些數(shù)據(jù)進行標準化和統(tǒng)計分析后得到結(jié)論，構(gòu)造適當?shù)奈㈥嚵行酒情_展后續(xù)研究的基礎。

2.生物學意義分析

主要指通過分析芯片雜交數(shù)據(jù)，研究差異表達***的生物學意義。通常，在芯片中某一或發(fā)育時期可能有成千上萬個差異表達***。例如，***芯片分析植物根部可能有400多個特意表達的***，如果要將這些***的來龍去脈都搞清楚，可能要追溯超過4000篇以上的文獻(假設1個***需要查閱10篇文獻)。這種不撿***的方法耗時耗力，所獲得的結(jié)果也往往沒有意義。