使用廣泛的氨基和羧基偶聯(lián)劑就要數(shù)EDC和NHS(Sulfo-NHS)了。大多數(shù)情況下,同時使用EDC/NHS的交聯(lián)于只使用EDC的,替代肖特玻片公司,NHS的使用能夠極大增強偶聯(lián)效率。但也有個例,比如2012年的一篇工作(Diagnostics (Basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.),他們在APETS修飾的金芯片和96孔板表面組裝一抗,發(fā)現(xiàn)單獨使用EDC比同時使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。
物理吸附是簡單的***固定化方法,包括靜電作用、疏水作用、極性相互作用等非共價鍵作用。優(yōu)點顯而易見—省時省力省錢,缺點也是不可避免—(1)***偶聯(lián)的取向(orientation)不可控,什么是替代肖特玻片,完全由概率來確定;(2)物理吸附作用力弱,上海替代肖特玻片,應(yīng)用時有***脫離現(xiàn)象。學(xué)中,經(jīng)常用到物理吸附的地方就是一抗的負載過程。比如在ELISA板(聚)和側(cè)流試紙條(纖維素膜)等表面負載***的時候,用到的就是物理吸附作用。
盡管如此,通常原位合成方法仍然比較復(fù)雜,除了在***芯片研究方面享有盛譽的 Affymetrix 等公司使用該技術(shù)合成探針外,其它中小型公司大多使用合成點樣法。后一方法在多聚物的設(shè)計方面與前者相似,合成工作用傳統(tǒng)的 DNA 或多肽固相合成儀以完成,只是合成后用特殊的自動化微量點樣裝置將其以比較高的密度涂布于纖維膜、尼龍膜或玻片上。支持物應(yīng)事***行特定處理,例如包被以帶正電荷的多聚賴酸或氨基***?,F(xiàn)在已有比較成型的點樣裝置出售,如美國 Biodot 公司的點膜產(chǎn)品以及 Cartesian Technologies 公司的 PixSys NQ/PA 系列產(chǎn)品。前者產(chǎn)生的點陣密度可以達到 400/cm2 ,后者則可達到 2500/cm2 。
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