ELISA***盒的操作方法——雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，卡那***ELISA***盒供應(yīng)商，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3.　加酶標：于各反應(yīng)孔中，四環(huán)素ELISA***盒報價，加入新鮮稀釋的酶標（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M***0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，北京ELISA***盒，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

ELISA***盒的應(yīng)用領(lǐng)域

ELISA法是診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的病種等方面的診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本，因此，也適合于流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物***各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大，可概括四個方面：

1、酶染色各種細胞內(nèi)成份的***。

2、研究抗酶的合成。

3、顯現(xiàn)微量的沉淀反應(yīng)。

4、定量檢測體液中抗原或成份。

Elisa***盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

重復(fù)性不佳，慶大***ELISA***盒報價，高CV值 

1  樣品不均一 加樣前充分混勻樣品，取樣確保移液位置一致；

2  包被板表面遭到*** 洗板加樣時盡量小心，避免***板的包被表面

3  孔與孔之間的交叉污染 孵育后取下蓋子小心操作，避免孔與孔的污染；封板膜不能重復(fù)使用

4  加樣量不一致 樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

5  邊緣效應(yīng)（外周孔顯色較中心孔深） 孵育時盡量100 rpm旋轉(zhuǎn)混勻

6  微量加樣不準確 保證微量加樣的準確性和均一性

7  不正確的洗滌 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，確定每一步的洗滌

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