過敏原體外檢測(cè)試劑盒
本試劑盒采用管式酶免（ELISA）分析法，對(duì)人血清或血漿
中的過敏原特異性IgE 抗體進(jìn)行定性/半定量檢測(cè)。
[概述]
IgE抗體存在于具有過敏體質(zhì)個(gè)體的血清中，這些個(gè)體在接觸
到特異性過敏原時(shí)主要出現(xiàn)速發(fā)型過敏反應(yīng)的癥狀。對(duì)血清中總IgE
抗體水平的檢測(cè)，可為判定機(jī)體對(duì)過敏的易感性提供有價(jià)值的信息。
而對(duì)血清中特異性過敏原檢測(cè)可對(duì)患者進(jìn)行脫敏治療提供有力的依
據(jù)。皮試是常用的一種簡(jiǎn)單，低成本的體內(nèi)過敏原檢測(cè)方法，但皮
試存在準(zhǔn)確性低，結(jié)果不易判斷以及危險(xiǎn)性較大等缺點(diǎn)。體外檢測(cè)
中的放射過敏吸附試驗(yàn)(RAST)，熒光酶標(biāo)法(FEIA)和酶標(biāo)法(ELISA)
已被用于定量檢測(cè)來源于不同過敏原的IgE抗體。過敏的臨床癥狀主
要包括過敏反應(yīng)、花粉熱、氣喘、過敏性濕疹、皮炎、呼吸不暢和
鼻炎。通過檢測(cè)大部分常見的過敏原或總IgE抗體來診斷過敏反應(yīng)，
就能更好地預(yù)防和治療。
本試劑盒是一種體外定性/半定量的酶免法，可同時(shí)獨(dú)立地檢測(cè)
各種常見的過敏反應(yīng)，并估計(jì)人血清或血漿中IgE的總水平。這種獨(dú)
特的裝置由一只反應(yīng)管組成，反應(yīng)管中含有一系列塑料段，在這些塑
料段的表面包被有單一過敏原或過敏原混合物或單克隆抗體，這樣，
患者血清中的IgE抗體就可以與它們分別反應(yīng)形成免疫復(fù)合物而沉淀
下來。由于過敏原的選擇不同，本試劑盒檢測(cè)的具體內(nèi)容有多種形式。
每個(gè)反應(yīng)管均帶有陽性、陰性對(duì)照，有助于結(jié)果的分析。
[原理]
當(dāng)具有過敏抗原固化于表面的載體與病人血清培養(yǎng)在一起后，
血清中特異性IgE（一抗）就會(huì)特異地結(jié)合到抗原上，此特異結(jié)合的
抗體可被酶聯(lián)的二抗所識(shí)別，加入顯色劑后，二抗所聯(lián)的酶使顯色劑
由黃色變成紫色。顯色的深度與血清中特異性IgE成正比；能半定量
地檢測(cè)血清中特異性IgE的濃度。
[試劑盒組成]
反應(yīng)管： 5支
酶聯(lián)二抗（綠色）：4 毫升 X 1
底物/指示劑:2.5 毫升 X 5
清洗液: 60 毫升 X 1
10 毫升塑料杯 X 5
1 毫升注射器 X 5
需自備的材料: 水槽和自來水,紗布計(jì)時(shí)器
[貯存] 收到試劑盒后，應(yīng)將試劑盒貯存在2－6 ℃。
[標(biāo)本收集] 患者無需特殊的準(zhǔn)備，也無需禁食。使用血清或血漿。
標(biāo)本不需稀釋，反應(yīng)管內(nèi)吸入標(biāo)本量約600l。試驗(yàn)前，血清或血漿
應(yīng)密閉保存在4－8℃中，至多5 天。標(biāo)本可在-20℃中保存3 個(gè)月，
但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
[試驗(yàn)操作] 使用前須平衡至25－30 ℃。
1．去掉尾端的封頭和頂端的塞子，讓反應(yīng)管內(nèi)的保存液排出。用紗
布擦試細(xì)頭。
2．將注射器接在反應(yīng)管的頂端，將標(biāo)本由細(xì)頭抽到注射器接頭處，
不要將標(biāo)本抽入注射器并避免氣泡抽入反應(yīng)管內(nèi)。將反應(yīng)管平放，
在室溫下(25－30℃)反應(yīng)2小時(shí)。
3．將標(biāo)本從反應(yīng)管排出，抽出注射器的推桿，由注射器針筒向反應(yīng)
管內(nèi)注入1 毫升清洗液，清洗液讓流盡，將注射器的推桿插入并
推到底，用紗布擦試細(xì)頭。
4．將綠色的酶聯(lián)二抗由細(xì)頭抽到注射器的接頭處，并避免氣泡
抽入反應(yīng)管內(nèi)。將反應(yīng)管平放，在室溫下(25－30℃)反應(yīng) 4
－10 小時(shí)。
5．將酶聯(lián)二抗由反應(yīng)管排出，抽出注射器的推桿。加五滴清洗
液到注射器針筒中，讓它流下。再在注射器針筒內(nèi)注入1 毫
升清洗液，讓它流過反應(yīng)管。將注射器的推桿插入并推到底，
用紗布擦試細(xì)頭。
6．在塑料燒杯中注入少量(約2 毫升) 清洗液。通過反應(yīng)管將
清洗液抽到注射器中。抽出注射器的推桿，讓清洗液流出。
7．在注射器針筒內(nèi)注入1 毫升清洗液，讓它自然流下。重復(fù)一
次。將注射器的推桿插入并推到底，用紗布擦試細(xì)頭。
8．將黃色的底物/指示劑通過反應(yīng)管抽到注射器中。
9．平放反應(yīng)管，強(qiáng)陽性標(biāo)本在幾分鐘內(nèi)可觀察由黃到紫的顏色
變化，弱陽性標(biāo)本可在90 分鐘內(nèi)觀察顏色變化。
注意：為了觀察到明顯的顏色變化，一旦加入底物/指示劑后，
請(qǐng)勿動(dòng)反應(yīng)管，避免晃動(dòng)管內(nèi)液體。
[結(jié)果解釋]
本試劑盒是一種定性/半定量試驗(yàn)，用來檢測(cè)血清標(biāo)本中IgE
抗體的水平。對(duì)特殊過敏原的強(qiáng)烈過敏反應(yīng)，會(huì)在幾分鐘內(nèi)很快
地出現(xiàn)較深的紫色。弱的過敏反應(yīng)出現(xiàn)顏色變化的時(shí)間要長(zhǎng)。陰
性結(jié)果的顏色與其兩邊的隔離帶的顏色一樣。
出結(jié)果的最佳時(shí)間是在加入底物/指示劑30 分鐘時(shí)。在這段
時(shí)間內(nèi)，含有來源于(針對(duì))一種或多種過敏原(產(chǎn)生的)IgE 抗體
的血清，無論IgE 抗體水平是正常或已升高，都會(huì)在任何相應(yīng)反
應(yīng)部分出現(xiàn)特異性的紫色?？贵w水平非常低時(shí)，可將顯色時(shí)間適
當(dāng)延長(zhǎng)到90 分鐘，也會(huì)出現(xiàn)結(jié)果，只要特異性的反應(yīng)顏色能和
反應(yīng)管中其它部分非特異性的背景區(qū)分開即可判斷為陽性結(jié)果。
本試劑盒中含有多種過敏原，以便盡可能檢測(cè)出IgE 介導(dǎo)的
過敏反應(yīng)的患者。反應(yīng)部分的陽性結(jié)果，并不能排除患者對(duì)其它
不包含在這試驗(yàn)中的過敏原的敏感性，尤其是樹木過敏原的免疫
原性交叉反應(yīng)是很局限的。同樣，陰性的結(jié)果并不能說明患者對(duì)
其它過敏原不敏感。
[注意事項(xiàng)]
1. 本試劑盒僅供體外檢測(cè)用. 失效期后的產(chǎn)品請(qǐng)勿使用.
2. 檢測(cè)板不能重復(fù)使用, 也不能供一個(gè)以上的樣品同時(shí)使用. 本試劑盒內(nèi)各
種試劑不能與其它試劑混用。
4. 操作過程中有可能與病人的血清接觸, 建議操作時(shí)戴上一次性醫(yī)用手套.
5. 所有操作均應(yīng)按照本說明書的步驟進(jìn)行, 酶聯(lián)反應(yīng)中抗原抗體反應(yīng)是不可
逆的, 要嚴(yán)格注意加樣順序, 不能顛倒.
6. 在檢測(cè)操作過程有3次加樣步驟, 即加標(biāo)本(血清), 酶結(jié)合物, 顯色劑. 每
次加樣均由與檢測(cè)板相連的1毫升注射器平穩(wěn)吸入, 一般加樣至注射器接
口, 加入標(biāo)本或酶結(jié)合劑后應(yīng)仔細(xì)檢查, 如發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)片段表面有氣泡,
應(yīng)將試劑排回試劑瓶后直接重新加樣.
7. 實(shí)驗(yàn)過程靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物目的. 通過洗滌以清
除殘留在檢測(cè)板中的沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì), 以及在反應(yīng)過程
中吸附于固相載體的干擾物質(zhì)（蛋白質(zhì)等), 洗滌是檢測(cè)操作的關(guān)鍵步驟,
為防止因清洗不徹底導(dǎo)致游離酶殘留在管內(nèi), 而造成非特異性顯色, 操作
者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌。