- 一般隨機(jī)生成57個堿基(19個氨基酸)的插入片段, 是任何***DNA的讀碼框。這些DNA包括表達(dá)的蛋白圖譜,蛋白質(zhì)工程或肽圖譜。
- 簡單,快速完成cDNA和***組***的測序
- 重要的DNA序列修飾,如啟動子區(qū)域或結(jié)合基序。
The EZ-Tn5™ In-Frame Linker Insertion Kit
是一個基于轉(zhuǎn)座子的蛋白修飾系統(tǒng) ,它可快速容易的產(chǎn)生隨機(jī)57bp編碼表達(dá)蛋白的DNA片段。由于插入的是19個密碼子的可讀框架,盒子可用來鑒定關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,結(jié)合區(qū)域,催化區(qū)和任何蛋白位點(diǎn)。
該盒子包括一個卡那***篩選標(biāo)記,兩端是NotI位點(diǎn)。程序包括引入19個密碼子的***DNA插入片段,如圖1.一個簡單的體外酶反應(yīng),隨機(jī)插入一個EZ-Tn5 <Not I/KAN-3>轉(zhuǎn)座子到每個***中,產(chǎn)生>106卡那抗性插入***。插入的***可通過***功能分析鑒定或通過轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)的測序圖譜鑒定。所選擇的***,通過notI酶切,轉(zhuǎn)座子中存在卡那抗性(圖2)。
每個notI消化的***可再連接后轉(zhuǎn)化***大腸***(e.g., TransforMax™ EC100™ )感受態(tài)細(xì)胞,
得到的***每個含有一個隨機(jī)的19密碼子的插入可讀框。因此在插入位點(diǎn)兩端蛋白保留了原有的氨基酸序列。盒子提供兩個未標(biāo)記的引物,方便EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)的測序和繪制圖譜。
優(yōu)勢:
- 產(chǎn)生> 10 6插入***,每一個***隨機(jī)插入單一的??轉(zhuǎn)座子,為客戶提供***的全覆蓋。
- 比傳統(tǒng)Linker Scanning Mutagenesis更通用,在EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子的插入是隨機(jī)的,并不限定于預(yù)先存在于***的DNA限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。
- 獨(dú)特的notI酶切位點(diǎn)方便連接插入制作圖譜和額外的***構(gòu)建。
參考文獻(xiàn)
- Hoffman, L. and Loomis, K. (2000) Epicentre Forum 7(3), 4.
*Covered by issued and/or pending patents.
Catalog No. |
Size | |
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EZ-Tn5™ In-Frame Linker Insertion Kit | |
EZI04KN | 10 Reacti*** |
Contents: EZ-Tn5™ Transposase,EZ-Tn5™ <Not I/KAN-3> Transposon,EZ-Tn5™ 10X Reaction Buffer, EZ-Tn5™ 10X Stop Solution,Forward and Reverse Primers,Control Target DNA, Sterile Water. |
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