腺病毒包裝原理介紹

腺病毒是一種沒有包膜的直徑為79-90nm的顆粒，由252個(gè) 殼粒呈二十面體排列構(gòu)成。每個(gè)殼粒的直徑為7-9nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子，兩端各有長約100bp的反向重復(fù)序列。***腺病毒 已知有33種，分別命名為ad1-ad33，研究詳細(xì)得是ad2.

腺病毒是一種無包膜的球型結(jié)構(gòu)的病毒，***檢測多少錢，遺傳物質(zhì)為線型 雙股DNA形式。腺病毒的特點(diǎn)：（1）gan染范圍廣對人致病性低；（2）對增殖和非增殖細(xì)胞均具有g(shù)an染性；（3）能有效進(jìn)行增殖；（ 4）病毒滴度高；（5）不整合到染色體中，無插入致突變性；(6)外源***裝載容量大。由于腺病毒的這些特點(diǎn)使其廣泛地應(yīng)用于體 外***轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)接種yi苗、和***zhi療等各個(gè)領(lǐng)域。

實(shí)驗(yàn)方法

1.獲得目的***序列；

2.構(gòu)建病毒表達(dá)載體質(zhì)粒；

3.表達(dá)載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組；

4.gan染HEK293，包裝出病毒；

5.病毒擴(kuò)增、濃縮；

6.滴度測定。

2.引物純化方式有哪些，如何選擇？

◆　脫鹽

寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu)，首先必須去除保護(hù)基團(tuán)。通過濃氨水處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，pcr，2-乙氧基--磷酸二脂鍵的保護(hù)基團(tuán)，以及堿基的保護(hù)基團(tuán)基（苯甲?；彤惗』┍蝗コ?，從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而，必要的去保護(hù)步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機(jī)化合物。所有非必須有機(jī)化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進(jìn)行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機(jī)雜質(zhì)，但它不能有效移除合成中產(chǎn)生微量的提前終止的寡核苷酸雜鏈。然而，pcr引物設(shè)計(jì)，脫鹽的寡核苷酸還是能夠滿足ＰＣＲ檢測等基礎(chǔ)生物研究。

◆　BioRP / OPC純化

如果寡核苷酸以“三苯”的形式合成，則N-寡核苷酸包含5’-DMT基團(tuán)，提前終止的寡核苷酸不包含該基團(tuán)。因?yàn)镈MT基有強(qiáng)的親脂的特性，有5’-DMT基團(tuán)的寡核苷酸與反相樹脂有親和性，因此反相親和樹脂通常被用于寡核苷酸的純化。利用反向樹脂和5’－DMT寡核苷酸存在強(qiáng)親和力，但是提前終止的寡核苷酸不包含DMT基團(tuán)，所以，我們能夠成功的把想要的N-寡核苷酸從提前終止的寡核苷酸雜質(zhì)中分離出來。

蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定服務(wù)

蛋白質(zhì)（protein）是有機(jī)大分子，是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物和生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、新陳代謝、抵御外來物質(zhì)入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是氨基酸序列，通過鑒定氨基酸序列來匹配它的蛋白質(zhì)，PCR實(shí)驗(yàn)室，這是定性研究，是蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)，也是蛋白質(zhì)組學(xué)的重要技術(shù)之一。

質(zhì)譜一般由離子源、質(zhì)量分析器（Mass analyzer）和離子檢測器（Detector）三部分組成。傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析，但隨著新的離子化技術(shù)的出現(xiàn)，如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF)和電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)等，質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的途徑?，F(xiàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)基本研究手段是：以生物質(zhì)譜技術(shù)為，對蛋白質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模、高通量分離、鑒定和分析。

蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成肽段混合物，經(jīng)MAILDI或ESI等軟電離手段將其離子化，然后通過質(zhì)量分析器將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。通過實(shí)際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級質(zhì)譜峰圖和二級質(zhì)譜峰圖進(jìn)行的比對，進(jìn)行蛋白鑒定。

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