lncRNA測(cè)序

長(zhǎng)鏈非編碼RNAs（long non-coding RNAs，lncRNAs）一般是指長(zhǎng)度大于200 nt的RNA，位于細(xì)胞核內(nèi)或胞漿中，不參與蛋白質(zhì)編碼功能，以RNA形式在多種層面上（表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等）調(diào)控***的表達(dá)水平，在生命活動(dòng)中具有重要作用。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA測(cè)序（long non-coding RNA sequencing，lncRNA-Seq）是一種使用特定方法降低樣本中rRNA 的豐度，對(duì)富集到的 RNA進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，再對(duì)高通量測(cè)序儀產(chǎn)出的數(shù)據(jù)進(jìn)行信息分析的研究方法。lncRNA-Seq可一次性獲得樣本中全部的lncRNAs信息，對(duì)lncRNAs的類(lèi)別、功能進(jìn)行的深入分析，從而快速準(zhǔn)確地獲得與特定生物學(xué)過(guò)程（例如發(fā)育、***等）相關(guān) lncRNA信息。

RNA提取預(yù)備工作

RNA酶（Rnase）是導(dǎo)致RNA降解主要的物質(zhì)。此酶非常穩(wěn)定，在一些的條件下只可暫時(shí)失活，但限制因素去除后又迅速***活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白***ji不能使所有的Rnase完全失活。

1.它廣泛存在于人的皮膚上，因此制備RNA時(shí)必須戴手套

2.RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對(duì)取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部，***檢測(cè)多少錢(qián)，可基本達(dá)到要求。

3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理

（1）塑料制品：盡量使用一次性無(wú)菌塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品，如沒(méi)有開(kāi)封使用過(guò)，通常不必再處理。

RNA提取及注意事項(xiàng)

研究***的表達(dá)和調(diào)控時(shí)，實(shí)時(shí)熒光定量pcr，需要從***或細(xì)胞中分離純化RNA。RNA質(zhì)量的高低經(jīng)常影響RT-PCR、cDNA庫(kù)構(gòu)建和Northern Blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的成敗。

主要***

Trizol是一種新型總RNA抽提***，***檢測(cè)怎么做，內(nèi)含異***胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞，***細(xì)胞釋放出的核酸酶。

1.

Trizol***含有，具***性和刺激性，注重操作。

2.

RNase污染的主要來(lái)源是操作過(guò)程中手和空氣中的浮沉，注重配帶手套，樣品盡可能蓋嚴(yán)。

3. 細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會(huì)降低后得率，因?yàn)橐徊糠諶NA會(huì)殘留在未裂解的細(xì)胞中。細(xì)胞裂解之后要看不見(jiàn)顆粒狀物質(zhì)（結(jié)締***和骨除外）。在清洗和裂解細(xì)胞時(shí)在低溫下操作，河北pcr，防止在操作過(guò)程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。

4. 酵母和一些***由于細(xì)胞壁的特別結(jié)構(gòu)，可以加入Trizol***同時(shí)加入無(wú)RNase的玻璃珠并劇烈振蕩，使細(xì)胞裂解充分。

2-8℃ 避光保存一年。

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