13.合成的引物5"端是否有磷酸化
答：合成的引物5"為羥基，沒有磷酸基團(tuán)。如果需要您可以用多核苷酸激酶進(jìn)行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成時(shí)直接在5′或3′端進(jìn)行磷酸化，需要另外收費(fèi)。
14.引物片段退火后不能連接到載體上是什么問題？
連接反應(yīng)需要引物的5’磷酸基團(tuán)。如果需要將合成的引物退火直接連接相應(yīng)的載體上，引物需要磷酸化。磷酸化的產(chǎn)物如果還不能連接載體上，需要檢查載體的酶切效果，需要改善引物退火的條件。SiRNA分子具有特殊的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，退火的難度較大，退火時(shí)需要提高退火溫度。
蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)
細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)不同生命過程有重要影響。例如在許多***的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中，dna檢測(cè)，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)策略和非標(biāo)記的(label free)定量策略，其中標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記(如 SILAC、15N 標(biāo)記)，以及體外標(biāo)記(如 iTRAQ、TMT 標(biāo)記) 。
傳統(tǒng)的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)組通常可以鑒定出約1000種蛋白，對(duì)全蛋白質(zhì)組的覆蓋僅在5~10%左右，***檢測(cè)怎么做，不能滿足高通量定量蛋白質(zhì)表達(dá)譜分析的要求。我們結(jié)合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可在細(xì)胞與***類樣品中鑒定直至多于10000個(gè)蛋白，對(duì)全蛋白質(zhì)組的覆蓋>60%。結(jié)合生物信息學(xué)分析，為您構(gòu)建高通量蛋白質(zhì)定量表達(dá)譜。
DNA測(cè)序檢測(cè)
1. PCR測(cè)序反應(yīng)
(1)取0.2ml的PCR管，用記號(hào)筆編號(hào)，將管插在顆粒冰中，按下表加***:
所加***測(cè)定模板管標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管
BigDye Mix
1μl
1μl
待測(cè)的質(zhì)粒DNA
1μ 1
pGEM-3Zf (+)雙鏈DNA
-1μ1
待測(cè)DNA的正向引物
1μ 1
M13(-21)引物- 1μ 1
滅菌去離子水
2μ 1
2μ 1
總反應(yīng)體積5μ 1，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。
(2)將PCR管置于9600或2400型PCR儀.上進(jìn)行擴(kuò)增。98C變性2min后進(jìn)行PCR循環(huán)，咸陽(yáng)pcr，
PCR循環(huán)參數(shù)為96C 10s， 50C 5s， 60°***min， 25 個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增結(jié)束后設(shè)置4C保溫。
2.乙醇法純化PCR產(chǎn)物
(1) 將混合物離心，將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到1.5ml EP管中。
(2)加入25μ 1/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于
4C離心30 min，小心棄上清。
(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗滌沉淀2次。12 000r/min 于4C離心5min，小心棄上清和
管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。
3.電泳前測(cè)序PCR產(chǎn)物的處理。
(1)加入12μ 1的TSR于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解DNA沉淀，稍離心。
(2)將溶液轉(zhuǎn)移至蓋體分離的0.2ml PCR管中，稍離心。
(3)在PCR儀上進(jìn)行熱變性(95C 2min)，實(shí)時(shí)熒光定量pcr，冰中驟冷，待_上機(jī)。
4..上機(jī)操作按儀器操作說(shuō)明書安裝毛細(xì)管，進(jìn)行毛細(xì)管位置的校正，人工手動(dòng)灌膠和建立
運(yùn)行的測(cè)序順序文件。
5.儀器將自動(dòng)進(jìn)行序列分析，并可根據(jù)用戶要求進(jìn)行序列比較。如測(cè)序序列已知，可通過
序列比較以星號(hào)標(biāo)出差異堿基處，提高工作效率。
6.測(cè)序完畢按儀器操作規(guī)程進(jìn)行儀器清洗與***。
實(shí)時(shí)熒光定量pcr-咸陽(yáng)pcr-英瀚斯(查看)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司位于江蘇省南京市棲霞區(qū)和燕路371號(hào)東南大學(xué)***大學(xué)科技園科創(chuàng)樓A301。在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的浪潮中拼博和發(fā)展，目前英瀚斯在技術(shù)合作中享有良好的聲譽(yù)。英瀚斯取得全網(wǎng)商盟認(rèn)證，標(biāo)志著我們的服務(wù)和管理水平達(dá)到了一個(gè)新的高度。英瀚斯全體員工愿與各界有識(shí)之士共同發(fā)展，共創(chuàng)美好未來(lái)。
