闌尾炎動(dòng)物模型

方法  成年大鼠，后固定，無菌條件下開腹，將闌尾及末端回腸和與闌尾系膜相連的腸段(下稱臨近腸段)移出腹腔并置壁上。剪開闌尾尖部的闌尾系膜，把闌尾尖部腸內(nèi)容物擠至闌尾近端腸腔內(nèi)，距尖部1cm處用1號(hào)絲線將闌尾管攀結(jié)扎。把結(jié)扎了的闌尾尖部擺放在回腸根部和臨近腸段之間。用小圓針細(xì)絲線(000號(hào))把回腸根部和臨近腸段相應(yīng)位置縫合一針(僅穿透漿肌層)，后將結(jié)扎闌尾包埋于其下。再順續(xù)沿末端回腸由遠(yuǎn)端至近端與臨近腸段相應(yīng)位置緊密縫合1～2針，將闌尾全部包埋在縫合的腸段之下。將外置的全部腸段送入腹腔，兩層縫合關(guān)腹，無菌紗布包扎傷口，送回籠中飼養(yǎng)觀察?；虺赡昙彝?，后固定于***臺(tái)架上，備皮消毒鋪巾后，無菌條件下腹正中切口開腹6cm，小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)***外包，尋及盲腸提出闌尾，于闌尾根部以4號(hào)絲線緊貼闌尾壁穿過系膜結(jié)扎闌尾，隨后將闌尾納回腹腔，逐層關(guān)腹。術(shù)后，在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)測定動(dòng)物體溫，行壞死闌尾炎腔內(nèi)容物***培養(yǎng)，包囊或壞死闌尾大小的檢測，以及肉眼病理觀察和***形態(tài)學(xué)改變的鏡檢。

特點(diǎn)  大鼠術(shù)后15d，闌尾呈膿性壞死，外裹一層纖維性包囊，囊內(nèi)含有大量的***，模型成功率高。兔術(shù)后6～12h，闌尾充血、增粗、水腫；12～24h時(shí)，闌尾腫脹、增粗更為明顯，外被膿苔與周圍腸管粘連，北京動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包，部分闌尾壁可見斑點(diǎn)狀出血灶，腹腔內(nèi)有膿性滲液出現(xiàn)。與闌尾膿苔粘連的周圍腸管亦呈明顯的水腫、充血，甚或有闌尾系膜形成。腹腔滲液***培養(yǎng)有大腸生長。術(shù)后24h，兔體溫可升至40℃左右。在整個(gè)造模過程中，模型動(dòng)物神態(tài)萎靡，不食不飲，腹部脹滿，2～4d內(nèi)陸續(xù)。

根據(jù)GB19489-2004實(shí)驗(yàn)室 生物 安全通用要求，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的 生物 安全要點(diǎn):

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)設(shè)施應(yīng)參照BSL1-4實(shí)驗(yàn)室的要求，還應(yīng)考慮對(duì)動(dòng)物呼吸、排泄、毛發(fā)、抓咬、掙扎、逃逸、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（如染毒、***檢查、取樣、解剖、檢驗(yàn)等）、動(dòng)物飼養(yǎng)、動(dòng)物及排泄物的處置等過程產(chǎn)生的潛在生物危害的防護(hù)。應(yīng)特別注意對(duì)動(dòng)物源性氣溶膠的防護(hù)，例如對(duì)動(dòng)物的剖檢應(yīng)在負(fù)壓剖檢臺(tái)上進(jìn)行。

應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的種類、身體大小、生活習(xí)性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡冗x擇具適當(dāng)防護(hù)水平的、于動(dòng)物的、符合***相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的 生物安全柜 、動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施、消毒設(shè)施和清洗設(shè)施等。

實(shí)驗(yàn)室建筑應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不能逃逸，非實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物（如野鼠、昆蟲等）不能進(jìn)入。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（如空間、進(jìn)出通道等）應(yīng)符合所用動(dòng)物的需要。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣不應(yīng)循環(huán)。動(dòng)物源氣溶膠應(yīng)經(jīng)適當(dāng)?shù)倪^濾/消毒后排出，***動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包，不能進(jìn)入室內(nèi)循環(huán)。

如動(dòng)物需要飲用無菌水，供水系統(tǒng)應(yīng)可安全消毒。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的溫度、濕度、照度、噪聲、潔凈度等飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)符合***相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

前l(fā)ie腺素E2對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞株NR8383 合成血管內(nèi)皮生長因子促進(jìn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞成管、遷移的影響

　　方法：分別采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受體抑zhi劑AH6809+10 nmol/L EP4受體抑zhi劑AH23848 處理的NR8383 細(xì)胞作為各實(shí)驗(yàn)組，選擇未經(jīng)PGE2以及其特異性受體抑zhi劑處理的NR8383 細(xì)胞作為對(duì)照組，采用Western blot 和qPCR方法檢測各組NR8383細(xì)胞內(nèi)VEGF蛋白以及mRNA的表達(dá)水平；收集以上各處理組的細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別刺激1HUVECs，運(yùn)用TRANSWELL 小室、Matrigel 膠細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)方法，觀察PGE2調(diào)控巨噬細(xì)胞對(duì)HUVEC 遷移效應(yīng)和成管能力的影響。

　　結(jié)果：隨著NR8383 細(xì)胞培養(yǎng)液中加入PGE2濃度增gao，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課題外包選哪家，其 VEGF蛋白表達(dá)和VEGF mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2處理過的NR8383細(xì)胞培養(yǎng)上清液可以顯著增加HUVEC細(xì)胞形成的小管面積，形成小管面積隨著PGE2處理濃度的增加而增加（P<0.05）；HUVECs的遷移運(yùn)動(dòng)也隨著PGE2處理濃度的升高不同程度的增強(qiáng)，HUVECs趨化的數(shù)量顯著升高（P<0.05）；研究發(fā)現(xiàn)PGE2特異性的EP2/EP4 受體拮抗劑AH6809/AH23848，可以顯著***PGE2 增強(qiáng)NR8383 細(xì)胞內(nèi)VEGF mRNAs 表達(dá)的作用并且也顯著***PGE2 增強(qiáng) NR8383細(xì)胞促進(jìn)HUVECs成管和趨化能力的效應(yīng)（P<0.05）。

　

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