11.如何溶解引物?
答:干燥后的引物質(zhì)地非常疏松,開蓋前好離心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,熒光定量pcr,將引物粉末收集到管底。根據(jù)計(jì)算出的體積加入去離子無菌水或10mM Tris pH7.5緩沖液,室溫放置幾分鐘,振蕩助溶,離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水,因?yàn)橛行┱麴s水的pH值比較低(pH4-5),引物在這種條件下不穩(wěn)定。
12.如何保存引物?
答:引物合成后,dna檢測,經(jīng)過一系列處理和純化步驟,旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前,室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物-20度可以長期保存。如果對實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高,合成的OD數(shù)較大,pcr,建議分裝,避免反復(fù)凍融。修飾熒光引物需要避光保存。
活性氧檢測***盒(Reactive oxygen species assay kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的***盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,PCR實(shí)驗(yàn)室,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。 本***盒提供了活性氧陽性對照***Rosup以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物(compound mixture),濃度為50mg/ml。
一、注意事項(xiàng)
1、探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會導(dǎo)致背景較高。
2、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。
3、盡量縮短探針裝載后到測定所用的時(shí)間(刺激時(shí)間除外),以減少各種可能的誤差。
4、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
ELISA 是一種結(jié)合抗原、抗ti特異性反應(yīng)和酶對底物高xiao催化作用的高敏***免yi學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗ti既保留其免yi學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應(yīng),洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,再加入酶標(biāo)記的抗原或抗ti,通過反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶含量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
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