小鼠精原gan細胞分離富集和培養(yǎng)

成年小鼠gao丸中約有108個細胞，細胞實驗外包，其中約有 2×104個是精原gan細胞，僅占gao丸生精上皮細胞總數的 0.02～0.03%，精原gan細胞數量太少不利于體外培養(yǎng).分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象，先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min，用胎牛xue清終止消化，用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細胞懸液，30%percoll不連續(xù)密度梯度法離心富集精原gan細胞，再根椐未分化精原gan細胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c- kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來，并在體外進行培養(yǎng)嘗試. 結果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%，CD90.2陽性細胞占28.98±4.51%， 二者都陽性細胞占8.98±2.98%，CD117陰性CD90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%，CD90.2陽性細胞占56.98±4.51%，二者都陽性細胞占 8.20±3.98%，CD117陰性CD90.2陽性細胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后 比較差異無顯著性(P>0.1)，細胞實驗，CD90.2陽性細胞和CD117陰性和CD90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標志分子，細胞實驗外包費用，percoll離心后細胞懸液經FACS分選后獲得細胞純度

選擇實驗外包公司需要注意哪些事項？

1. 實地考察

可以到公司實地考察一下實驗室，看一下實驗室環(huán)境、設備儀器情況，是否能滿足實驗方案所需條件。能整體承接課題，動物細胞。一些大型儀器公司不一定有，看有沒有高校平臺資源渠道共享。確保是真實進行實驗的，這樣后續(xù)實驗結果數據也比較可靠。

2. 方案評估

實驗合作前期一般會進行所需實驗內容的評估，來確定終實際實驗方案和報價。方案評估可以看出外包團隊的性。一個可靠的外包公司會對方案提出針對性的建議，評估各項實驗是否能做，以及根據預算情況和實際操作對細節(jié)適當地調整。任何實驗都是有不確定性的，細胞實驗外包選哪家，但是前期敲定好方案能為后續(xù)實際開展實驗打下良好基礎，也會省去許多隱患和麻煩。

透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失，核染色質固縮、邊.集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質緊實，細胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和調亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。

結果評判:調亡細胞體積變小，細胞質濃縮。調亡I期( pro-apoptosis nuclei)的細胞核內染色質高度盤繞，出現許多稱為氣穴現象( c***itati)的空泡結構; IIa 期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產生調亡小體。

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