蛋白質(zhì)雙向電泳實驗流程
1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白
2.雙向電泳分離待測樣品
(1)一相等電聚焦前處理按照所用儀器的廠商提供操作手冊進行。蛋白質(zhì)上樣濃度不要超過10mg/mL，否則會造成蛋白質(zhì)的聚集或沉淀。
(2)等電聚焦完畢后(約需24hr），若不立即進行第二相電泳，膠條可夾在兩層塑料薄膜中于-70℃保存數(shù)月。
(3)等電聚焦好的膠條按廠商提供的操作手冊平衡兩次。平衡完畢后，于電泳儀上用12.5%SDS-PAGE凝膠進行電泳分離。儀器設置為2.5W/膠 45min，15W/膠 5-8hr，20℃。
3.銀染法對凝膠進行染色
(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)顯影(8)定影(9)水洗
3.凝膠掃描及圖像分析
(1)圖像掃描：凝膠染色后采用Image scanner以300dpi，16-bit模式（65536灰階）進行掃描。
(2)圖像分析：掃描完畢后，凝膠繼續(xù)置于1%yi酸中于4℃保存。掃描后的圖像用ImageMaster 2D Platinum software軟件進行分析。分析按照軟件廠商提供的說明書進行。以***小點面積30，平滑度2為主要參數(shù)***大限度檢測蛋白質(zhì)點。以目標蛋白質(zhì)3個重復具有相同趨勢，目標蛋白質(zhì)相鄰位點的相對一致性，至少2個重復有2倍以上差異作為判定差異表達蛋白質(zhì)的標準。
轉錄組測序
轉錄組即某個物種或特定細胞在某一功能狀態(tài)下產(chǎn)生的RNA的總和，商洛pcr，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與***組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環(huán)境下，其***表達情況是不相同的。轉錄組測序（RNA-Seq）是指利用第二代高通量測序技術進行cDNA測序，快速地獲取某一物種特定qi官或***在某一狀態(tài)下的轉錄本。相對于傳統(tǒng)芯片而言，RNA-Seq無需預先設計探針，即可對物種的細胞類型的轉錄組進行檢測，能夠提供較的數(shù)字化信號，更高的檢測通量以及更廣泛的檢測范圍，是目前深入研究轉錄組復雜性的良好工具。
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