難點與關(guān)鍵點

將灌注針插入主動脈內(nèi)是灌注固定的關(guān)鍵，實驗動物模型公司，也是難點。首先準(zhǔn)確找到主動脈，這是此步驟的要點?？捎脺厣睇}水將胸腔內(nèi)的血液沖洗干凈，用鑷子輕輕夾住心 外膜（夾的越少越好，以免影響取材）將心臟向左上方提起，動物實驗，即可看清主動脈，又可使灌注針很容易地插入主動脈內(nèi)。插入時動作要慢，針尖方向不要偏向右側(cè)，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，則將針退后、調(diào)整方向重新進(jìn)針，直到進(jìn)入主動脈，灌注針進(jìn)入主動脈后可在心臟的上方看到其位置，灌注針進(jìn)入主動脈的長度 好為 3~5 毫米，然后用絲線扎緊。切勿將灌注針放在左心室內(nèi)，臨床前動物實驗，這樣由于主動脈瓣的關(guān)閉，灌注液很難進(jìn)入主動脈，而是沿著心室的切口流出，致使灌注失敗。另 外，灌注針插入成功后，一定要用剪刀剪開右心耳而不是右心室，這是灌流液的出口。剪開心尖的位置一定要掌握好，動物實驗外包，不能偏右使灌注針插入右心室。

三、實驗指標(biāo)區(qū)域指標(biāo)開臂1停留時間、活動路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）開臂2停留時間、活動路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）開臂3停留時間、活動路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）其他臂停留時間、活動路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）四、實驗方法及應(yīng)用

1) 動物適應(yīng)實驗環(huán)境1周后，稱重，禁食24小時。此后每天訓(xùn)練結(jié)束后限制性地給予正常食料（據(jù)體重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使體重保持在正常進(jìn)食大鼠的80%~85%。

2) 第二天，迷宮各臂及***區(qū)分撒著食物顆粒（每只4~5粒，直徑約3~4mm）。然后，同時將4只動物置于迷宮***（通往各臂的門打開）。讓其自由攝食、探究10min。

3) 第三天，重復(fù)第二天的訓(xùn)練。這一過程讓動物在沒有很強(qiáng)的應(yīng)激條件下熟悉迷宮環(huán)境。

4) 第四天起，動物單個進(jìn)行訓(xùn)練：在每個臂靠近外端食盒處各放一顆食粒，讓動物自由攝食。食粒吃完或10min后將動物取出。

5) 第五天，將食物放在食盒內(nèi)，重復(fù)前一天的訓(xùn)練，一天2次。

6) 第六天以后，隨機(jī)選4個臂，每個臂放一顆食粒；各臂門關(guān)閉，將動物放在迷宮***；30s后，臂門打開，讓動物在迷宮中自由活動并攝取食粒，直到動物吃完所有4個臂的食粒。如經(jīng)10min食粒仍未吃完，則實驗終止。每天訓(xùn)練兩次，其間間隔1h以上。

高架十字迷宮試驗 ：

EPM ) 既可以建立焦躁應(yīng)激的模型也是國際上公認(rèn)的經(jīng)典測量焦躁反應(yīng)的方法。其原理是利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐 懼心理， 形成動物的矛盾沖突來考察大鼠的焦躁狀態(tài)。 EPM 測試的項目中， 焦躁動物的 OE% 和 OT% 會明顯降低， 經(jīng)典抗焦躁藥則使兩者升高， OE + CE 反映了動物的運動活性。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的 OE% 和 OT% 顯著下降， 運動活性也降低。HD反映了動物在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為， 代表動物對陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避， 與焦躁程度有一定相關(guān)性， 本研究中空瓶應(yīng)激后的大鼠 HD行為減少; RR可用來觀察藥有無***作用及***強(qiáng)度。上述結(jié)果證實， 慢性應(yīng)激后的大鼠明顯處于焦躁狀態(tài)， 說明慢性焦躁應(yīng)激大鼠模型的制備成功， 且通過量化的標(biāo)準(zhǔn)客觀反映出大鼠的焦l慮程度。