自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，青海細(xì)胞，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、

病毒和***等。單丹磺酰尸胺(Dansylcad***erine，MDC是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，流式細(xì)胞檢測(cè)，通常被于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm ，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm。Leagene MDC染色液適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，可與EB合用雙染。

大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)

方法：分離大鼠主動(dòng)脈，直接貼壁于培養(yǎng)皿中，熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，免yi組化Ⅷ因子相關(guān)抗原染色鑒定細(xì)胞.結(jié)果:約24小時(shí)***塊邊緣有游離的 新生細(xì)胞長(zhǎng)出，7天即融合成片.消化傳代后細(xì)胞呈短梭形或三角形，單層生長(zhǎng)，鋪路石狀，Ⅷ因子表達(dá)陽(yáng)性，細(xì)胞生物學(xué)，呈指數(shù)增殖.凍存后復(fù)蘇細(xì)胞活性均超過(guò)90%.結(jié) 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，凍存細(xì)胞存活率高，為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.

細(xì)胞凍存有哪些注意事項(xiàng)？

細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開(kāi)開(kāi)始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是的。

細(xì)胞凍存的步驟：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的凍存培養(yǎng)液;

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);

離心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的終密度為 5×106/ml~1×107/ml;

將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;

在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者;

凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

青海細(xì)胞-英瀚斯-細(xì)胞實(shí)驗(yàn)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司堅(jiān)持“以人為本”的企業(yè)理念，擁有一支高素質(zhì)的員工***，力求提供更好的產(chǎn)品和服務(wù)回饋社會(huì)，并歡迎廣大新老客戶光臨惠顧，真誠(chéng)合作、共創(chuàng)美好未來(lái)。英瀚斯——您可信賴的朋友，公司地址：江蘇省南京市棲霞區(qū)和燕路371號(hào)東南大學(xué)***大學(xué)科技園科創(chuàng)樓A301，聯(lián)系人：戴經(jīng)理。