脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染

1、細胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。

2、轉(zhuǎn)染前換上沒有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。

3、將質(zhì)粒DNA (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中+DMEM至50u1。

4、脂質(zhì)體5ul補培養(yǎng)基至50ul混勻靜止5分鐘(質(zhì)粒與脂質(zhì)體比例為1:2或1.5:2.5)。

5、將含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基與含質(zhì)粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。

6、吸取混合物均勻加入每一個孔中。

7、將6孔板放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6小時后吸出培養(yǎng)基換上新配置的培養(yǎng)基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培養(yǎng)24小時。

軟瓊脂培養(yǎng)克l隆形成試驗基本步驟:

(1)取對數(shù)生長期細胞，用0.25%胰蛋白酶消化并輕輕吹打，使之成為單細胞，作活l細胞計數(shù)，用含20%胎牛血l清的DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細胞密度至1x106細胞/L。然后根據(jù)實驗要求作梯度倍數(shù)稀釋。

(2)用蒸餾水分別制備出1.2%和0.7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40日中不會凝固。

(3)按1:1比例使1.2%的瓊脂糖和2xDMEM培養(yǎng)基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后，取3mL混合液注入直徑6cm平皿中(10cm平皿加7~ 10mL)，冷卻凝固，可作底層瓊脂置CO2溫箱中備用。

(4)按1:1比例讓0.7%的瓊脂糖和2xDMEM培養(yǎng)基在無菌試管中相混以后，再向管中加入0.2mL的細胞懸液，充分混勻，細胞實驗外包哪家好，注入鋪有1.2%瓊脂糖底層平皿中，逐形成雙瓊脂層。待上層瓊脂凝固后，置入37回5%CO2溫箱中培養(yǎng)10~14天。

(5)把平皿放置在倒置顯微鏡下，觀察細胞數(shù)。計算形成率。軟瓊脂培養(yǎng)法常用檢測腫l瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞系。試驗中瓊脂與細胞相混時，瓊脂溫度不宜超過40日。接種細胞的密度每平方厘米不超過35個，一般6cm的平皿接種1000個細胞。正常細胞在懸浮狀態(tài)下不能增殖，不適用于軟瓊脂克l隆形成試驗。

軟瓊脂集落形成率實驗(軟瓊脂克l隆)

將1.2%低熔點瓊脂糖與2x細胞培養(yǎng)基以1:1的體積比混合制備0.6%的底層瓊脂，細胞實驗外包公司，6孔板中每個孔1.4ml溫室凝固，取對數(shù)期細胞，胰酶消化后吹散成單個細胞懸液，計數(shù)，并調(diào)細胞濃度為10000個/ml，將0.6%低熔點瓊脂糖與2x細胞培養(yǎng)基以1:1的體積比混合，制備0.3%的上層瓊脂，每孔加1ml 上層瓊脂和100ul單細胞懸液(約1000ell/wel)， 混勻，室溫凝固。置于37目，5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3周，計數(shù)含50個細胞以上得克l隆，計算細胞集落形成率，細胞實驗外包選哪家，Spotll 采集圖像。

關于細胞培養(yǎng)的常見問題

Q：培養(yǎng)液到底要不要加雙抗（青&鏈）？

A：雙抗不是細胞生長必需的。我們培養(yǎng)細胞時不常規(guī)使用，因為連續(xù)使用會促進耐藥性細胞株的產(chǎn)生，導致輕度污染持續(xù)存在。一旦將從培養(yǎng)液中去除，這種輕度污染終將發(fā)展成為大規(guī)模污染。具體情況，可根據(jù)自己實驗室的環(huán)境，自行決定是否使用雙抗。

Q：細胞培養(yǎng)，上海細胞實驗，能更換成其它種類的培養(yǎng)基嗎？

A：我們強烈建議好使用細胞提供機構或細胞庫推薦的生長培養(yǎng)液。有些細胞可能會適應在不同培養(yǎng)基中生長，在做好保種的條件下，可以分出部分細胞做測試。

上海細胞實驗-細胞實驗外包哪家好-英瀚斯(推薦商家)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供?！?**病理,細胞生物,分子生物學平臺,動物模型科研外包服務”選擇南京英瀚斯生物科技有限公司，公司位于：江蘇省南京市棲霞區(qū)和燕路371號東南大學***大學科技園科創(chuàng)樓A301，多年來，英瀚斯堅持為客戶提供好的服務，聯(lián)系人：戴經(jīng)理。歡迎廣大新老客戶來電，來函，親臨指導，洽談業(yè)務。英瀚斯期待成為您的長期合作伙伴！