脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

1、細(xì)胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。

2、轉(zhuǎn)染前換上沒(méi)有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。

3、將質(zhì)粒DNA (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中+DMEM至50u1。

4、脂質(zhì)體5ul補(bǔ)培養(yǎng)基至50ul混勻靜止5分鐘(質(zhì)粒與脂質(zhì)體比例為1:2或1.5:2.5)。

5、將含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基與含質(zhì)粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。

6、吸取混合物均勻加入每一個(gè)孔中。

7、將6孔板放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)后吸出培養(yǎng)基換上新配置的培養(yǎng)基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培養(yǎng)24小時(shí)。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染及解決方法

黑點(diǎn)污染

黑色的游動(dòng)點(diǎn)能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們?cè)诘捅剁R下顯示為黑色圓點(diǎn)，天津細(xì)胞，在高倍鏡下顯示為可移動(dòng)的黑點(diǎn)。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，原代細(xì)胞，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點(diǎn)污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)動(dòng)物體無(wú)明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無(wú)明顯變化。在同一批培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類(lèi)似的現(xiàn)象。

解決方法：黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)沒(méi)有明顯影響，細(xì)胞增殖后會(huì)自然消失，因此除了置換外，無(wú)需特殊處理。如果細(xì)胞可能被小的運(yùn)動(dòng)點(diǎn)污染，建議增加培養(yǎng)皿細(xì)胞密度，以提高細(xì)胞存活率。

透射電鏡觀察自噬小體方法

利用光學(xué)顯微鏡，借助相應(yīng)的染色方法，可以觀察細(xì)胞凋亡時(shí)會(huì)出現(xiàn)的一系列形態(tài)特征。常用的染色法包括臺(tái)盼藍(lán)、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光學(xué)顯微鏡下可以觀察到核固縮、質(zhì)濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現(xiàn)象。

電鏡形態(tài)學(xué)觀察法是一種比較經(jīng)典、可靠的方法，被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。電鏡下凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發(fā)泡現(xiàn)象及凋亡小體出現(xiàn)等。

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