蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)

細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。例如在許多***的發(fā)生和發(fā)展進程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)策略和非標(biāo)記的(label free)定量策略，其中標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記(如 SILAC、15N 標(biāo)記)，pcr引物設(shè)計，以及體外標(biāo)記(如 iTRAQ、TMT 標(biāo)記) 。

傳統(tǒng)的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)組通?？梢澡b定出約1000種蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質(zhì)表達譜分析的要求。我們結(jié)合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可在細胞與***類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋>60%。結(jié)合生物信息學(xué)分析，為您構(gòu)建高通量蛋白質(zhì)定量表達譜。

二、使用說明

1、裝載探針

對于刺激時間較短（通常為2小時以內(nèi)）的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞。對于細胞刺激

時間較長（通常為6小時以上）的細胞，先用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞，后裝載探針。

原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細胞。按照1：1000用無培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。去除細胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA的體積為1毫升。37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。

單細胞RNA測序

單細胞RNA測序也稱scRNA-Seq。通常而言，一般的***細胞RNA-seq實驗會產(chǎn)生1000萬個讀數(shù)，dna檢測，如果一個***的頻率超過50RPKM，pcr，即每百萬讀數(shù)中每千個堿基中超過50個，這一***即被認為有表達。泊松分布下，1kb長的***有超過500個讀數(shù)和4%的小變異系數(shù)，pcr實驗室，即CV值；哺乳動物細胞通產(chǎn)含有200，000個mRNA，因此至少要用50個單細胞一起才能到達小CV值；考慮到逆轉(zhuǎn)錄的效率和環(huán)境干擾等因素，為得到準(zhǔn)確的表達和細胞種類的識別，需要使用的細胞數(shù)量實際要更多。