凍存袋，可千萬別這么用哈！

1.不要使用金屬管夾

2.不要離心

3.不要在凍存袋上直接寫字標(biāo)識(shí)凍存細(xì)胞的信息

4.不要在凍存袋表面粘帖標(biāo)簽不推薦使用同一凍存袋多次凍融細(xì)胞

5.DMSO稀釋以后才能放進(jìn)凍存袋，CS250凍存袋多少錢，DMSO濃度不要超過10%

6.復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)建議把凍存袋放在一個(gè)保護(hù)袋中進(jìn)行融化

7.不要超過凍存袋推薦的工作體積

凍存袋實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

生長(zhǎng)良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機(jī)

冷凍方法理論準(zhǔn)備:

(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量消失，凍存袋報(bào)價(jià)，亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。

(2）程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。

凍存袋方法的改進(jìn)

自1977年以來，我們應(yīng)用四級(jí)梯度降溫凍存法對(duì)30余株哺乳動(dòng)物細(xì)胞及2株節(jié)肢動(dòng)物細(xì)胞共1000多支安瓶進(jìn)行了冷凍保存，效果較好，凍存袋代理，大部分細(xì)胞的活存率在70%以上。在此基礎(chǔ)上對(duì)8株抗登革4型(DEN一4)病毒雜交瘤細(xì)胞400多支安靚進(jìn)行了凍存。鑒于四級(jí)降溫凍存法步驟多，需要經(jīng)過4℃冰箱和一20℃冰箱長(zhǎng)達(dá)7~8小時(shí)的梯度降溫，凍存袋，較難適應(yīng)單工作中細(xì)胞凍存的需要。因此，自1982年以來我們摸索了影響細(xì)胞凍存的主要因素，確定了雜交瘤細(xì)胞凍存的適保護(hù)劑濃度(1.2〕，并研制成功細(xì)胞凍存簡(jiǎn)易裝置。

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