細(xì)胞凍存復(fù)蘇方法

1.  細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱37°C預(yù)熱20min，備用。

3.  二亞砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，備用。

4.  從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400°C水浴中，CS250凍存袋批發(fā)，快速搖晃，直至凍存液完全融化。

5.  將細(xì)胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養(yǎng)液，CS250凍存袋，離心（1000r/min，5min）。

6.  用培養(yǎng)液懸液混懸沉淀細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，方培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.  記錄復(fù)蘇日期。

凍存袋的作用

適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢***條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。

凍存袋操作流程

（1）冰凍當(dāng)天進(jìn)入***局域網(wǎng)，查詢當(dāng)日***間冰凍安排表，大致了解當(dāng)日的冰凍情況，并提前通知當(dāng)日負(fù)責(zé)冰凍送片的初檢醫(yī)生，避免遺漏。

（2）取材前確定標(biāo)本冰凍報(bào)告已發(fā)出，核對(duì)標(biāo)本病理號(hào)、住院號(hào)，準(zhǔn)確記錄其病理號(hào)、住院號(hào)、姓名（至少有其中2項(xiàng)）于凍存***登記本上。

（3）在新鮮標(biāo)本取材臺(tái)上取材，并使用取材器具，同一天使用頻繁時(shí)，每取完一例標(biāo)本器具應(yīng)清洗后浸泡于消毒液中，以防止其他標(biāo)本污染。

（4）在不影響外檢取材的前提下，CS250凍存袋多少錢，充分取材。良變?nèi)∽銐蛄坎≡?，CS250凍存袋哪家好，病變?nèi)∽銐蛄坎≡罴?**旁正常***（***旁正常***遠(yuǎn)離病灶應(yīng)盡量>2cm）。

（5）將所取標(biāo)本切割成直徑1～2mm的***塊，不同標(biāo)本及同一標(biāo)本不同部位裝入相應(yīng)凍存管中，做好標(biāo)記（注意順序，切取標(biāo)本、夾放凍存管都應(yīng)遵循“先正常-后”的順序，避免***污染）。

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