細胞凍存步驟

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，200-074-400凍存袋供應商，加入適量PBS洗1-2遍;

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化;

3.待消化到位后加入適量血漿或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min;

4.配制凍存液，待細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，轉移到凍存管中;

5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉移到液氮中保存。

6.凍存細胞后應取出一管復蘇，檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內長期保存，

為穩(wěn)妥起見可在細胞凍存半年后復蘇培養(yǎng)，觀察細胞生長情況，再繼續(xù)凍存

凍存袋的背景知識

采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，CS250凍存袋供應商，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。

凍存袋方法的改進

自1977年以來，我們應用四級梯度降溫凍存法對30余株哺乳動物細胞及2株節(jié)肢動物細胞共1000多支安瓶進行了冷凍保存，200-074-401凍存袋供應商，效果較好，大部分細胞的活存率在70%以上。在此基礎上對8株抗登革4型(DEN一4)病毒雜交瘤細胞400多支安靚進行了凍存。鑒于四級降溫凍存法步驟多，需要經過4℃冰箱和一20℃冰箱長達7~8小時的梯度降溫，凍存袋供應商，較難適應單工作中細胞凍存的需要。因此，自1982年以來我們摸索了影響細胞凍存的主要因素，確定了雜交瘤細胞凍存的適保護劑濃度(1.2〕，并研制成功細胞凍存簡易裝置。