細(xì)胞凍存步驟

（1）將標(biāo)本編號，并用Marker筆仔細(xì)標(biāo)注于凍存管管蓋及管壁上，同時(shí)將每管編號、內(nèi)容物、取材日期記錄于登記本上。

（2）將凍存管裝入凍存袋，戴上棉線手套和防護(hù)面罩，CS50凍存袋報(bào)價(jià)，迅速放入液氮罐中30～60秒速凍，至凍存***完全凍住，取出待液氮完全揮發(fā)（注意動(dòng)作輕柔，避免液氮濺灑）。

（3）將經(jīng)液氮速凍后的***放入-80℃冰箱相應(yīng)編號盒中，長期保存。

（4）取材完畢后，將剩余新鮮標(biāo)本浸泡于10%中爾馬林液中固定（切記不要拿錯(cuò)病理號），做好和當(dāng)日冰凍值班醫(yī)生的交接，避免遺漏。

（5）清洗取材臺及取材器具，器具需用消毒液完全浸泡10～15min，CS250凍存袋報(bào)價(jià)，清水沖洗后擦干置于干燥處保存?zhèn)溆?，取材器具?yīng)定期高溫消毒。

細(xì)胞凍存的研究

細(xì)胞培養(yǎng)和保種技術(shù)廣泛用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，如研制、人工和再生***等。冷凍保存是目前細(xì)胞長期保存的通用方法，有利于降低細(xì)胞被微生物污染和細(xì)胞之間交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，并且能夠減少細(xì)胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變，避免有限細(xì)胞系出現(xiàn)***或轉(zhuǎn)化。然而，細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇過程會對細(xì)胞造成較大損傷，降低細(xì)胞膜中的脂質(zhì)含量，產(chǎn)生過氧化，同時(shí)影響細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和代謝途徑[1-3]。

細(xì)胞凍存的操作步驟

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，凍存袋報(bào)價(jià)，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，200-074-400凍存袋報(bào)價(jià)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

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