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博奧龍公司主要產(chǎn)品有抗0體制備***產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬多種科研用抗原抗0體、1200多種二抗,涵蓋20多個物種和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等標(biāo)記二抗;品類齊全的內(nèi)參標(biāo)簽抗0體;另有WB、IHC、ELISA、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)***及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
人們抽取動物的血液,分離出含抗0體的。這種體內(nèi)生產(chǎn)抗0體的傳統(tǒng)方法有許多缺點。例如所獲得的抗0體不純,不能連續(xù)生產(chǎn),動物飼養(yǎng)與管理工作繁重等,故長期以來***家們一直在探索在試管內(nèi)(即體外)生產(chǎn)抗0體的方法, 1976年英國劍橋大學(xué)兩位科學(xué)家Milstein和Koh1er將小鼠瘤細(xì)胞與小鼠的脾細(xì)胞雜交。小鼠瘤細(xì)胞能在體外增殖傳代并能分泌無抗0體活性的球蛋白;小鼠脾細(xì)胞能產(chǎn)生針對某種抗原的抗0體,但不能在體外增殖。將兩者融合成一種雜交瘤細(xì)胞,后者繼承了兩個親代細(xì)胞的特點,既可在體外增殖,又可產(chǎn)生針對某種抗原的抗休。一個雜交瘤細(xì)胞在體外不斷增殖所形成的細(xì)胞集團,被稱之為。
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單克0隆抗0體(單抗制備)制備過程有以下幾個步驟:
步驟一:細(xì)胞免0疫
免0疫動物免0疫動物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免0疫方案進(jìn)行免0疫注0射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免0疫器0官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克0隆,制備服務(wù),使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
步驟二:細(xì)胞融合
采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾0臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨0髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨0髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。
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選擇性培養(yǎng)
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨0髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃 piao呤-鳥piao呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補救途徑合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃 piao呤-鳥piao呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死0亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃 piao呤鳥piao呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨0髓瘤細(xì)胞能無0限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
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