細(xì)胞復(fù)蘇操作方法

2.1從液氮罐取出凍存細(xì)胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，快速融化。

2.2準(zhǔn)備離心管，加入2倍凍存細(xì)胞體積的細(xì)胞培養(yǎng)基，待凍存管中細(xì)胞完全融化后，將凍存細(xì)胞懸液緩慢加入離心管中。

2.3 1200-1500rpm 5min離心，棄上清。

2.4加入適量新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩慢懸浮細(xì)胞，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶中，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.5 24h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。

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使用方法

1. 用37℃水浴解凍細(xì)胞凍存液，并上下振蕩數(shù)次混勻。

備注：為了盡量減少污染，未使用完的細(xì)胞凍存液***好凍回-20℃，反復(fù)凍融不影響使用效果。有沉淀

屬于正常情況，主要為DMEM高糖培養(yǎng)基中的脂類與鹽類的析出。

2. 用細(xì)胞消化液將生長(zhǎng)良好的細(xì)胞消化成單細(xì)胞，細(xì)胞凍存液，并用細(xì)胞計(jì)數(shù)器或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度。

備注：懸浮細(xì)胞不需要消化但仍需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，不易消化成單細(xì)胞的各種293細(xì)胞等***好使用含有EDTA

的胰酶進(jìn)行消化。

3. 用低速離心沉淀細(xì)胞，棄去上清。

備注：通常2000~3000rpm離心5~10min即可。

4. 用適量細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞。

備注：細(xì)胞濃度可根據(jù)情況調(diào)整為1~5×106/ml，通常為3×106/ml左右。

存儲(chǔ)條件

儲(chǔ)存于4℃以下，質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起，為期兩年。3個(gè)月以上沒有使用凍存液計(jì)劃時(shí)，盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低，推薦將產(chǎn)品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟：

1、 從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即置于37℃水浴槽中快速解凍。

2、 待凍存管中的細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于凍存管中與細(xì)胞混合，將其中的混合液移至含有約5ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中，1000rmp離心5分鐘，收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液（注意勿將細(xì)胞沉淀倒掉）。

3、 加入適量的新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入細(xì)胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細(xì)胞移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。

4、 鏡檢觀察，待細(xì)胞狀態(tài)***后可進(jìn)行其他研究或者培養(yǎng)處理。

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