凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1. 從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。

2. 待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，將其中的混合液移至離心管中，1000rmp，快速細(xì)胞凍存液，5分鐘離心收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液（操作時(shí) 小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

3. 加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入到細(xì)胞沉淀，輕柔地混勻，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。

4. 鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法經(jīng)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。

原位復(fù)蘇方式：

1、從冰箱取出凍存培養(yǎng)板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。

2、待凍存的細(xì)胞懸液完全融化后，輕輕吸去細(xì)胞凍存液，按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

細(xì)胞冷凍保存方法

凍存管凍存方式：

1、按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。

2、按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。

3、取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1，000~2，000 rpm，4℃，3~5 min）。移去離心管中的上清液。

4、加入適量無(wú)血0清細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢混合均勻，制成細(xì)胞混合液。

5、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示的冷凍保存管中建議每管1ml或1.5ml。。

6、直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，冷凍保存。

特點(diǎn)描述

QuickFreezing-2×M化學(xué)組成明確，以DMEM為母液，含有DMSO，不含牛血0清或其他蛋白成分。QuickFreezing-2×M由于其獨(dú)0特的細(xì)胞保護(hù)配方，在凍存過(guò)程中細(xì)胞可直接放入-70℃冰箱，無(wú)需繁瑣的程序降溫操作。QuickFreezing-2×M支持在-70℃冰箱中整板凍存，可在單克0隆抗0體篩選過(guò)程中方便地凍存所有初篩陽(yáng)性克0隆以備用。QuickFreezing-2×M不含牛血0清或其他蛋白成分，不引入造成細(xì)胞種子污染的外源因子，如各種牛源病毒和支原體等。QuickFreezing-2×M不含牛血0清或其他蛋白成分，因而同樣適用于無(wú)血0清培養(yǎng)的細(xì)胞凍存。QuickFreezing-2×M的包裝設(shè)計(jì)為10ml×5，因而無(wú)需再次分裝，而且在使用過(guò)程中不易造成不同使用者或不同細(xì)胞間的交叉污染。QuickFreezing-2×M經(jīng)過(guò)SP2/0和P815等哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞的測(cè)試，復(fù)蘇后細(xì)胞存活和生長(zhǎng)良好。QuickFreezing-2×M建議常溫運(yùn)輸，-20℃保存，無(wú)菌取用，有效期18個(gè)月。

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