甲胎蛋白(AFP)是一種胎兒特異性糖蛋白，分子量約70，000～72，000道爾頓^，在胚胎肝0臟和卵黃囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次報道開放性神0經(jīng)管畸形胎兒、羊水中有高水平的AFP。若胎兒羊水中AFI’值高于均值常見于患無腦兒或脊柱裂的胎兒，亦見于其他多種畸形，如先0天性shen病、食道或腸閉鎖、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺發(fā)育不全等。1983年發(fā)現(xiàn)母體血0清AFP水平的降低與唐氏***有密切關(guān)系一。因此制備高0效特異的AFP單克0隆抗0體(McAb)具有重要的意義。

動物免0疫

使用 quickantibody 作為免0疫佐劑，對小鼠腿部肌肉***免0疫，MRJ 重組蛋白( 1 μg /mL) 與免0疫佐劑各200 μL 混勻免0疫 6-8 周齡 BALB / c 小鼠 4 只，每只*** 100 μL。初次免0疫后第 21 天同樣的方法進(jìn)行第二次免0疫，第 35 天尾靜脈取少量血做效價檢測，間接 ELISA 檢測效價滴度高于 1 ∶ 8 000 則進(jìn)行沖擊免0疫，沖擊免0疫直接以不加佐劑的 MRJ 蛋白對小鼠沖擊免0疫一次，每只 20 μg。沖擊免0疫后 96 h 內(nèi)取脾0臟細(xì)胞做細(xì)胞融合。

由于改良免0疫法只需二次基礎(chǔ)免0疫而常規(guī)免0疫法則需要2倍于改良法的免0疫次數(shù)，所以改良法抗原用量明顯少于常規(guī)法，從而大大減少了實(shí)驗成本的消耗。

此外，本實(shí)驗通過對比兩種免0疫方法的細(xì)胞融合率及抗0體陽性率，發(fā)現(xiàn)改良免0疫法均顯著高于常規(guī)免0疫法。

經(jīng)過后續(xù)實(shí)驗，B細(xì)胞，證明改良法免0疫小鼠的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)二次克0隆化后，抗0體陽性率可達(dá)檢測孔的90％以上。雜交瘤細(xì)胞體外連續(xù)傳代培養(yǎng)，并凍存復(fù)蘇后仍具有分泌AFP—McAb的能力，并經(jīng)染色體計數(shù)結(jié)果表明已成功獲得一株AFP—McAb細(xì)胞株。這表明改良法與常規(guī)方法具有同樣的有效性和穩(wěn)定性。

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