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哺乳動(dòng)物的轉(zhuǎn)染技術(shù)在60年代末70年代初即已引入。
將外源DNA 導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法大致可分為兩大類,即生物方法和物理化學(xué)方法。物理化學(xué)方法中常用的有磷酸鈣法、顯微注0射、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,以及***近出現(xiàn)的以高分子聚合物為載體的***傳遞技術(shù)。生物方法則主要是以病毒作為載體,通過(guò)病毒感0染的方式將外源DNA 導(dǎo)入到細(xì)胞中, 其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)***為常用。
磷酸鈣在良好的轉(zhuǎn)染條件下,可以在293T等細(xì)胞的轉(zhuǎn)染達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率。但磷酸鈣轉(zhuǎn)染有一個(gè)突出的問(wèn)題,非常不穩(wěn)定,尤其受PH值的影響非常大,在實(shí)驗(yàn)中使用的每種***都必須小心校準(zhǔn),保證質(zhì)量,因?yàn)樯踔疗x***優(yōu)條件十分之一個(gè)PH都可能導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗,經(jīng)常即使***熟練的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)者也不能保證每次磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功,他們可能經(jīng)常為莫名其妙的轉(zhuǎn)染失敗而沮喪。同時(shí),他們還經(jīng)常發(fā)現(xiàn),往往小體積的轉(zhuǎn)染比如6孔板以下的轉(zhuǎn)染效果比較理想,可一換到大皿,經(jīng)常轉(zhuǎn)染效率下降很快。磷酸鈣的先天缺陷往往是實(shí)驗(yàn)梗阻的主要原因。
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