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抗0體亞型鑒定原理：

抗0體亞型鑒定的原理是利用雙抗0體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克0隆抗0體或特異親和純化的單克0隆抗0體的類和亞類（可區(qū)分出 IgG1﹨IgG2a﹨IgG2b﹨IgG3﹨IgM﹨IgA）。采用小鼠抗0體共有位點(diǎn)的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗0體結(jié)合，再加入HRP 標(biāo)記的抗小鼠各類、亞類的抗0體來(lái)分別反應(yīng)，***后用 TMB 底物系統(tǒng)顯色并用稀***終止，再通過(guò)酶0標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)判斷被測(cè)單克0隆抗0體的類或亞類。

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什么是單克0隆抗0體？

單克0隆抗0體(MAb)，是針專一的抗原決定簇產(chǎn)生的抗0體，單克0隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗0體的B細(xì)胞與腫0瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)抗0體。

單克0隆抗0體制備的原理是什么？

要制備單克0隆抗0體需先獲得能合成專一性抗0體的單克0隆B淋巴細(xì)胞，但這種B淋巴細(xì)胞不能在體外生長(zhǎng)。而實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)骨0髓瘤細(xì)胞可在體外生長(zhǎng)繁殖，應(yīng)用細(xì)胞雜交技術(shù)使骨0髓瘤細(xì)胞與免0疫的淋巴細(xì)胞二者合二為一，得到雜0種的骨0髓瘤細(xì)胞。這種雜0種細(xì)胞繼承兩種親代細(xì)胞的特性，它既具有B淋巴細(xì)胞合成專一抗0體的特性，也有骨0髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性，用這種來(lái)源于單個(gè)融合細(xì)胞培養(yǎng)增殖的細(xì)胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克0隆抗0體。

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實(shí)驗(yàn)步驟：

1、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽(yáng)性、陰性對(duì)照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

2 、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入顯色劑 A 和顯色劑 B 各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

3 、ELISA***盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的 Ig 類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶0標(biāo)儀450nm 測(cè)長(zhǎng)，630nm 參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的 Ig 類或亞類(陽(yáng)性對(duì)照 OD 一般不小于0.8，陰性對(duì)照一般不高于0.15，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品 OD 大于陰性 OD+0.15，陰性 OD 低于0.05按0.05算)。

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