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DEAE-葡聚糖轉染法

DEAE-葡聚糖轉染法的原理時帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成復合物通過細胞內吞噬作用而使DNA轉導進入細胞核。此法只適合瞬時轉染實驗，轉染效率與DEAE-葡聚糖的濃度以及細胞與DNA/EDAE-葡聚糖混合液接觸時間的長短有關，可采用較高濃度的DEAE-葡聚糖（1g/L）作用較短時間（0.5-1.5h），也可用較低濃度（250mg/L）的DEAE-葡聚糖坐擁較長時間（8h）。

1. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中，輕搖細胞板或用加樣器吸打混勻。備注：轉染復合物可直接加入含血0清的細胞培養(yǎng)基中進行轉染。在極0少情況下會出現(xiàn)貼壁細胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉染細胞孔中吸取 500μl 培養(yǎng)基與轉染復合物預混后再加入細胞中。若在細胞瓶中進行轉染，直接加入到無細胞貼壁的對面或側面并搖勻即可。

2. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血0清或更換培養(yǎng)基。

3. 24~72 小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。

已有眾多的文獻報道，脂質體本身會參與細胞生理活動，脂質體轉染***，引起***表達的上調或下調。如參與PKC（蛋白激酶C）通路調節(jié)(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如***ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如與線粒體膜發(fā)生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；轉染siRNA造成脫靶效應等等。細胞毒性的大小往往意味著對細胞生理活動影響的大小，脂質體這些作用是造成細胞毒性的根本原因。這會對相關研究數(shù)據(jù)產生嚴重的干擾，甚至影響研究的結論。這已引起了許多研究者的注意。




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